基于化学发光免疫分析的疾病标志物和病原菌检测新方法研究

摘要

化学发光免疫分析法（Chemiluminescent immunoassay, CLIA）是将高灵敏度的化学发光检测技术和高特异性的免疫反应结合而提出的一种分析方法。CLIA作为一种超微量的非同位素标记的免疫检测手段，具有灵敏度高、特异性强、准确度高、无毒害、无需复杂的前处理、设备和操作简单、检测迅速等优点，非常适合于疾病标志物和病原菌的检测。
　　本文基于CLIA，结合共振能量转移和双位点分子识别模式分别构建了检测疾病标志物和病原菌的新方法:
　　1)基于共振能量转移的CLIA法检测人血清转铁蛋白
　　本文利用蜡烛灰通过简单的方法合成具有高效猝灭效率的非晶体碳纳米粒子(ACNPs)，并将ACNPs作为新型能量受体构建基于化学发光共振能量转移(CRET)的竞争性免疫分析新方法，用于检测人血清中转铁蛋白(TRF)含量。在研究中，ACNPs作为能量受体并标记待测物TRF制备ACNP-TRF纳米复合探针，与辣根过氧化物酶标记的抗体发生免疫结合。免疫反应作为一种桥梁把供体和受体之间的距离拉近，从而产生了显著的CRET效应。当样品中存在游离TRF时，与能量受体发生竞争性免疫反应，引起化学发光猝灭率降低，进而实现对TRF的定量分析。结果表明TRF的浓度在20-400 ng mL-1的范围内与化学发光强度具有良好的线性关系，检测限为20 ng mL-1。所构建的方法成功应用于人血清中TRF的检测，并且与商品化的ELISA试剂盒检测结果一致。所合成的ACNPs显示出比其它作为能量猝灭受体的纳米材料，如氧化石墨烯更强的猝灭能力。这种方法同样可以以较低的成本，简单的操作，较高的灵敏度和特异性检测其他疾病标志物。
　　2)基于双位点分子识别模式的化学发光类免疫分析法检测金黄色葡萄球菌
　　本文基于双位点分子识别模式构建了化学发光类夹心式免疫分析新方法，用于直接检测金黄色葡萄球菌。在研究中，我们选用万古霉素作为简单，低价，稳定的分子识别试剂，并将万古霉素标记辣根过氧化物酶制备高灵敏的化学发光探针。同时，利用IgG与金黄色葡萄球菌表面的A蛋白的特异性结合作用，进一步提高了其特异性。结果表明，金黄色葡萄球菌在1.0×103-2.0×106 CFU mL-1范围与化学发光强度呈现良好的线性关系，在信噪比为3时，检测限为330 CFU mL-1。该方法具有快速，准确，灵敏，特异，低价和操作简单的特点，具有很好的实际应用潜力。

目录

声明

摘要

缩写符号对照表

第1章 绪论

1．1 引言

1．2 化学发光基本理论

1．2．1 化学发光反应的基本原理

1．2．2 化学发光分析法原理

1．3 免疫分析的基本原理

1．4 化学发光免疫分析

1．4．1 化学发光免疫分析原理

1．4．2 化学发光免疫分析的类型

1．5 共振能量转移

1．6 化学发光免疫分析的应用

1．6．1 疾病标志物的检测

1．6．2 病原菌的检测

1．7 本文研究思路及创新点

参考文献

第2章 基于共振能量转移的化学发光免疫分析法检测人血清转铁蛋白

2．1 引言

2．2 实验部分

2．2．1 试剂与仪器

2．2．2 ACNPs的制备

2．2．3 ACNP-TRF复合探针的制备

2．2．4 化学发光免疫分析步骤

2．3 结果与讨论

2．3．1 ACNPs的表征

2．3．2 基于CRET的免疫分析的原理

2．3．3 ACNPs的猝灭效率

2．3．4 免疫反应的条件优化

2．3．5 特异性考察

2．3．6 TRF的检测

2．3．7 实际样品检测

2．4 结论

参考文献

第3章 基于双位点分子识别模式的化学发光类免疫分析法检测金黄色葡萄球菌

3．1 引言

3．2 实验部分

3．2．1 试剂与仪器

3．2．2 细菌标本的制备

3．2．3 化学发光免疫分析步骤

3．3 结果与讨论

3．3．1 基于双位点分子识别的化学发光类夹心式免疫分析的原理

3．3．2 化学发光免疫分析的条件优化

3．3．3 金黄色葡萄球菌的检测

3．4 结论

参考文献

致谢

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