高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术在局部麻醉药和黄酮类药物中的研究和应用

摘要

高效液相色谱（HPLC）是一种非常重要的分离、分析技术，它是以液体作为流动相，利用高压泵将缓冲液、单一溶剂或混合溶剂等流动相泵入色谱柱中，各组分在色谱柱中被分离后，进入检测器中进行检测，达到对样品分析的目的。共振瑞利散射（RRS），作为一个操作简单、灵敏度高的分析技术，吸引了很多研究者的关注。并且，它已成功应用于检测蛋白质、核酸、抗癌药物、农药、金属离子、维生素和表面活性剂等。我们将高效液相色谱与共振瑞利散射联用起来，实现了将高效液相色谱的高选择性和共振瑞利散射的高灵敏度相结合，建立一种高选择性和高灵敏度的高效液相色谱-共振瑞利散射联用技术（HPLC-RRS），并且将其成功应用于检测氨基酸、蛋白质、局部麻醉药、抗抑郁药、α1-受体阻滞剂、黄酮类药物和吲哚生物碱类等。HPLC-RRS具有非常突出的优势：（1）灵敏度高——该方法的灵敏度高于常规的紫外检测器，并且高于或接近于荧光检测器和化学发光检测器的水平；（2）应用范围广——既可应用于有荧光和紫外的物质，也可应用于没有荧光和紫外的物质；（3）选择性好——它克服了RRS选择性和重复性差的缺点，拓展了RRS光谱在新领域的研究，并且进一步扩展了HPLC的应用范围。
　　本文主要运用HPLC-RRS联用技术测定人尿中的局部麻醉药和黄酮类药物。我们对一系列的实验参数进行了优化，如高效液相色谱分离条件和 RRS检测条件，并对RRS增强的反应机理进行了充分的讨论。本文主要由绪论和正文组成，其中绪论部分简要概述了HPLC、RRS以及HPLC-RRS联用技术的工作流程、应用现状和发展前景。正文部分包括以下三个实验体系。
　　1.高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定尿液中的三种局部麻醉药
　　高选择性和高灵敏度的高效液相色谱-共振瑞利散射联用技术（HPLC-RRS）测定普鲁卡因、布比卡因和丁卡因。本实验使用Phenomenex Luna C18柱（250mm×4.6mm，5μm），柱温35℃。流动相:磷酸-三乙胺缓冲（pH=2.9）与乙腈的体积比为70/30，流速0.3mL/min。RRS检测是基于在酸性介质中局部麻醉药与赤藓红反应生成离子缔合物从而使RRS强度增强。在最佳条件下，检出限（S/N=3）为2.4～11.2ng/mL。加标尿样的回收率为95.8％～104.5%。该方法应用于测定人尿中的局部麻醉药，取得了令人满意的效果。此外，我们对反应机理进行了充分的讨论。
　　2.高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定三种黄酮类药物的方法和机理研究
　　本实验建立了一种利用高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定三种黄酮类药物的方法。我们以这三种黄酮类药物与乙基紫可形成离子缔合物而使共振瑞利散射信号显著增强为基础，采用高效液相色谱对三种黄酮类药物进行分离，实现了对三种黄酮类药物同时检测的目的。RRS强度检测波长λex=λem=325nm。本实验还利用紫外吸收光谱、扫描电子显微镜和量子化学计算等表征手段对该体系的反应机理和共振瑞利散射增强原因做了深入的讨论。该方法的检出限（S/N=3）为5.4～10.3ng/mL。线性范围为0.08～20μg/mL。
　　3.高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定人尿中的槲皮素和染料木素
　　本实验基于槲皮素和染料木素与结晶紫形成离子缔合物，从而导致体系的共振瑞利散射显著增强，据此建立了一种高效、选择性好、灵敏度高的HPLC-RRS联用技术测定尿样中的槲皮素和染料木素。我们对高效液相色谱分离条件和共振瑞利散射检测条件进行了优化，实验结果证实，此方法具有高的灵敏度和准确度。槲皮素和染料木素的检出限（S/N=3）分别为6.3ng/mL和8.6ng/mL。通过标准加入法测定人尿中的槲皮素和染料木素，加标回收率为97.1%～103.1%。因此，该方法能够很好的地测定人尿中的槲皮素和染料木素。

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第1章 绪论

1. 局部麻醉药的主要分析方法

2. 黄酮类药物的主要分析方法

3. 高效液相色谱法的简要概述[28]

4. 共振瑞利散射的简要概述

5. 高效液相色谱-共振瑞利散射（HPLC-RRS）联用技术的工作流程及应用

6. 高效液相色谱-共振瑞利散射（HPLC-RRS）联用技术的优点及展望

参考文献

第2章 高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定尿液中的三种局部麻醉药

1. 前言

2. 实验部分

3. 结果与讨论

参考文献

第3章 高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定三种黄酮类药物的方法和机理研究

1. 前言

2. 实验部分

3. 结果与讨论

参考文献

第4章 高效液相色谱与共振瑞利散射联用技术测定人尿中的槲皮素和染料木素

1. 前言

2. 实验部分

3. 结果与讨论

参考文献

硕士期间发表的论文

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