一种新的PRL-3的抑制剂(桑色素-7-硫酸酯钠)抗黑色素瘤细胞转移的研究

摘要

[目的]
　　 本项目拟在桑色素单硫酸酯钠盐体外抑制PRL-3酶活性以及下调肿瘤细胞中PRL-3表达的基础上，在细胞及动物水平研究桑色素-7-硫酸酯钠(NaMoS)抑制黑色素瘤细胞转移和体内抑瘤作用，为进一步研究NaMoS抗黑色素瘤转移的分子机制、开发成为具有自主知识产权的抗癌化合物以及预防黑色素瘤转移和复发提供新的实验依据。
　　 [方法]
　　 根据本教研室前期合成槲皮素硫酸酯钠盐的经验，利用桑色素和浓硫酸合成一个新的桑色素衍生物，并对其进行分离和纯化，备用。首先，在细胞水平上，利用CCK8法检测受试物对B16F10细胞的增殖抑制作用;划痕试验检测NaMoS抑制B16F10迁移的能力;Transwell检测其对B16F10细胞迁移和侵袭能力的抑制作用;同时用实时定量PCR在基因水平检测NaMoS对PRL-3 mRNA表达的影响;并在蛋白质水平运用Western blot检测NaMoS对B16F10细胞中PRL-3的表达情况，最后，在体内建立小鼠黑色素瘤细胞B16F10移植瘤模型，用受试物处理裸鼠，测量肿瘤体积和重量，并对淋巴结组织做病理检查和免疫组化分析。
　　 [结果]
　　 1.成功合成一种水溶性的桑色素衍生物（桑色素-7-硫酸酯钠）。
　　 2.CCK-8法检测发现NaMoS对B16F10细胞增殖无明显抑制作用。
　　 3.划痕试验、Transwell和粘附实验结果显示NaMoS能明显地抑制B16F10细胞体外迁移、侵袭和粘附能力，其最大抑制率分别为(62.14±1.89)％，(58.90±2.71)％，(65.65±2.21)％。
　　 4.实时定量PCR和westem blot检测结果显示NaMoS能抑制B16F10细胞中PRL-3表达。其中实时定量PCR结果表明100μmol/1时抑制基因表达作用最明显。
　　 5.成功构建了黑色素移植瘤裸鼠模型，经不同剂量的受试物处理荷瘤裸鼠后，发现高剂量的受试物在体内能明显抑制肿瘤生长，并下调PRL-3在淋巴结中表达。
　　 [结论]
　　 分离得到的桑色素-7-硫酸酯钠能在细胞和动物水平明显地抑制黑色素瘤的转移潜能，并减少淋巴结中黑色素瘤细胞数目及PRL-3的表达。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 体外实验研究桑色素-7-硫酸酯钠对B16F10细胞的作用

2．1 材料与方法

2．2 方法

2．3 实验结果

2．4 讨论

2．5 小结

3 桑色素-7-硫酸酯钠对黑色素瘤B16F10细胞移植瘤的作用

3．1 材料

3．2 方法

3．3 结果

3．4 讨论

3．5 小结

参考文献

文献综述 肝再生磷酸酶-3及其抑制剂在肿瘤中的作用

致谢

附录一 缩写词中英文对照

附录二 在读硕士期间的科研情况及获奖情况