CD8+CD28-T细胞在日本血吸虫感染免疫应答过程中的调节作用研究

摘要

[目的]
　　1.观察日本血吸虫感染小鼠胸腺、脾脏T淋巴细胞上CD28分子的动态变化及吡喹酮治疗后对CD28分子的影响。
　　2.观察日本血吸虫感染小鼠不同时间点CD8+CD28-T细胞在肝脏虫卵肉芽肿周围的分布及其在肝脏及外周血中比例的变化。
　　3.初步探讨日本血吸虫感染小鼠慢性期显著升高的CD8+CD28-T细胞免疫调节机制及其来源。
　　4.观察MSCs过继治疗对CD8+CD28-T细胞的影响及其对日本血吸虫感染小鼠的免疫调节作用。
　　[方法]
　　1.75只6～8周龄BALB/c雌鼠随机分为感染0周、1周、2周、4周、6周、8周、10周组及同期对照组，每组5只，另一组5只作为吡喹酮治疗组。每只小鼠感染10±2条尾蚴。吡喹酮治疗组于感染第5周时开始给药，给药剂量为150mg/kg/d，灌胃，连续给药3天，并于感染第8周时再次给药，给药剂量为300mg/kg/d，灌胃，连续给药3天，于感染第10周时处理小鼠。HE染色检测各组小鼠胸腺、脾脏、肝脏病理变化，流式细胞术检测各个时间点胸腺、脾脏T淋巴细胞上CD28分子的变化。
　　2.95只6～8周龄BALB/c雌鼠作为实验对象。每只小鼠感染10±2条尾蚴。感染0周、4周、6周、8周、10周、12周时分别处死小鼠，收集血清，免疫荧光检测CD8+CD28-T细胞在肝脏肉芽肿的分布情况，流式细胞术检测小鼠肝脏、外周血单个核细胞中CD8+CD28-T细胞比例;流式分选感染10周小鼠脾脏中CD8+CD28-T细胞，检测其对脾脏效应T细胞增殖的影响;检测CD8+CD28-T细胞过继治疗后对肝脏肉芽肿性炎症、胶原纤维沉积及机体免疫功能的影响;通过体内外实验探讨日本血吸虫感染慢性期大量升高的CD8+CD28-T的来源。
　　3.40只6～8周龄BALB/c雌鼠作为实验对象。每只小鼠感染10±2条尾蚴。于感染急性期(2w、3w、4w)给予MSCs过继治疗，采用流式细胞术检测过继治疗小鼠肝脏、脾脏、外周血中CD8+CD28-T细胞的比例，CCK-8检测脾细胞的增殖能力，肝脏HE及Masson染色检测肝脏肉芽肿性炎症及胶原纤维沉积程度。
　　[结果]
　　1.随着感染进程，胸腺细胞中CD28-T细胞比例逐渐增加，而脾脏中CD28-T细胞比例到感染慢性期才开始增加。吡喹酮治疗后只可以逆转脾脏CD4+T细胞上CD28分子的表达，而对胸腺CD4+/CD8+T细胞及脾脏CD8+T细胞上CD28分子表达无影响。
　　2.流式法检测结果显示:随着感染时间延长，外周血单个核细胞、脾脏和胸腺中CD8+CD28-T细胞逐渐增加，而肝脏中这群细胞在感染早期比例较低，感染6周达到峰值后有所下降，进入慢性感染阶段后又逐渐增加，同时肝脏免疫荧光与流式法检测结果一致。
　　血吸虫感染慢性期来源的CD8+CD28-T细胞过继到感染急性期小鼠体内后，与未过继治疗小鼠相比，过继小鼠状态明显转好、体重增加更明显、肝脏肉芽肿结节减少、颜色变浅、脾脏较小，肝脏HE染色和Masson染色结果显示，过继治疗后，虫卵沉积及炎症细胞浸润明显减轻、肝脏胶原纤维沉积减少、肉芽肿数目明显减少;这些病理变化的减轻可能与CD8+CD28-T细胞的能够特异地募集到虫卵肉芽肿周围、抑制效应T细胞（CD4+T细胞）增殖、抑制Th1型免疫应答的功能有关。
　　3.体内外实验证实，SEA和SWA免疫小鼠脾脏和外周血单个核细胞CD8+CD28-T细胞都有明显升高，其中SWA诱导脾脏细胞产生CD8+CD28-T细胞的能力更强，而SEA和SWA都不能通过诱导CD8+CD28+T细胞上CD28分子的丢失来生成CD8+CD28-T细胞。这说明日本血吸虫感染慢性期CD8+CD28-T细胞主要由SWA诱导外周免疫器官而生成，具体机制有待进一步研究。
　　4.MSCs经尾静脉注射的方式过继给日本血吸虫感染急性期小鼠后，小鼠肝脏肉芽肿性炎症减轻、肝脏胶原纤维沉积减少，脾细胞增殖能力减弱、肝脏CD8+CD28-T细胞比例明显增加，而脾脏和外周血中该群细胞变化不明显;这提示我们:上调感染小鼠体内CD8+CD28-T细胞的比例使机体维持一个低免疫应答状态而减轻宿主病理损害或许是MSCs一种新的调节方式。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

第一部分 日本血吸虫感染小鼠胸腺、脾脏T细胞CD28分子的动态变化研究

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

第二部分 CD8+CD28-T细胞对日本血吸虫感染免疫应答及虫卵肉芽肿形成的影响

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

第三部分 间充质干细胞(MSCs)通过CD8+CD28-T细胞发挥改善肉芽肿性炎症及肝脏纤维化的功能

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述(一) 衰老相关的免疫细胞及分子变化研究进展

综述(二) CD8+CD28-抑制性T细胞研究进展

致谢

附录

在读期间科研情况