中国汉族人群ADAM10启动子区基因多态性与脓毒症易感性及其下游底物、相关促炎症因子的关联性研究

摘要

[目的]
　　1.揭示中国汉族人群中ADAM10启动子区基因多态性(rs514049，rs653765)与脓毒症发病风险的关联性。
　　2.阐明ADAM10启动子区基因多态性与脓毒症、重症脓毒症、脓毒症休克不同分组的关联性。
　　3.探讨ADAM10启动子区基因多态性与ADAM10 mRNA表达量的相关性。
　　4.弄清ADAM10启动子区基因多态性与其脱落底物CX3CL1、IL-6R及TNF-α，相关促炎症因子IL-1β及IL-6表达量的相关性。
　　[方法]
　　采用病例-对照的研究方法，分别对中国南方湛江地区273例脓毒症病例、280例健康志愿者，中国北方哈尔滨地区167例脓毒症病例、170例健康志愿者进行基因型检测分析。根据国际规定的脓毒症分型方法，将病例组分为三个亚组，即一般脓毒症组、重症脓毒症及脓毒症休克组;根据28天死亡率，将病例组分为存活组与死亡组，进一步分析ADAM10启动子区两个基因多态位点(rs514049，rs653765)基因多态性与脓毒症及各亚组间的关联性。分别随机抽取76例脓毒症病例和84例健康志愿者标本，采取RT-PCR法检测外周血单核细胞ADAM10 mRNA的表达量;采取ELISA法检测外周血单核细胞中CX3CL1、IL-6R、TNF-α、IL-1β及IL-6表达量;采用双荧光素酶法检测ADAM10启动子单体型的活性，最终分析ADAM10启动子区基因多态性与ADAM10 mRNA，CX3CL1，IL-6R，TNF-α，IL-1β及IL-6的表达水平的关系。
　　[结果]
　　1.病例组和对照组中ADAM10基因rs514049、rs653765多态性位点的基因型频率的分布规律符合Hardy-Weinberg遗传平衡(P＞0.05，数据未显示)。此外，功效分析显示，就此样本量而言，rs653765有90.1％的功效，而rs514049有64.3％的功效，能够检测基因型的相对风险（OR=1.5）。
　　2.ADAM10 rs653765与rs514049多态性位点的基因型频率在脓毒症及健康对照组无明显统计学差异（各基因型、等位基因频率分布均P＞0.05），提示ADAM10 SNPs位点与脓毒症发病风险无明显关系。另外，ADAM10 rs653765基因多态性与脓毒症28天死亡率无明显关联(均P＞0.05)。
　　3.ADAM10 rs653765多态性位点的基因型及等位基因频率在重症脓毒症病例、重症脓毒症/脓毒症休克病例与脓毒症病例比较中存在显著性差异。根据显性模型(CC与CT/TT比较)，重症脓毒症或重症脓毒症/脓毒症休克病例与脓毒症病例相比存在统计学差异(分别P1=0.0014，P3=0.0037)，经Benjamini-Hochberg(BH)多重检验校正后，此统计学差异仍存在（分别P1=0.0014，P3=0.0037）;另外，重症脓毒症及重症脓毒症/脓毒症休克病例G等位基因的频率明显高于脓毒症病例(分别P1=0.0008，P3=0.0023)，经Benjamini-Hochberg(BH)多重检验校正后，此统计学差异仍存在（分别P1=0.0014，P3=0.0037），提示ADAM10 rs653765基因多态性与脓毒症发展风险相关。然而ADAM10 rs514049多态性位点的基因型和等位基因的频率分布在脓毒症病例组和健康对照组，脓毒症各亚组间均无显著性差异（P＞0.05）。
　　4.在重症脓毒症组中，带有rs653765 CC基因型的患者ADAM10 mRNA的表达量比对照组明显升高(P＜0.05);携带rs653765 CC基因型患者伴随外周血单核细胞中CX3CL1、IL-6R及TNF-α的表达量比对照组升高（均P＜0.05）。
　　5.双荧光素酶法检测发现在THP-1中ADAM10 C-A启动子单体型荧光素酶活性比T-A、T-C单体型明显增强（均P＜0.01）。
　　[结论]
　　1.在中国汉族人群中，ADAM10 rs653765基因多态性位点与重症脓毒症发展风险显著相关。
　　2.在重症脓毒症患者中，ADAM10 rs653765可作为功能性多态位点影响ADAM10 mRNA表达，影响ADAM10脱落底物CX3CL1、IL-6R及TNF-α表达。
　　3.ADAM10 rs514049基因多态性与脓毒症发病及发展风险均无显著关联。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的

1．3 研究内容

2 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

4 讨论

5 小结

参考文献

综述 去整合素金属蛋白酶10基因多态性与脓毒症相关性的研究进展

致谢

附录一：缩写词中英文对照

附录二：在读期间的科研情况

附录三：受试者知情同意书

附录四：医学伦理委员会批准函