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【6h】

腺病毒介导的BDNF基因转移治疗大鼠坐骨神经损伤

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前 言

第一部分重组腺病毒载体AxCA-BDNF的扩增、纯化和生物活性检测

实验一包装细胞-293细胞的培养与扩增

实验二重组腺病毒载体的扩增和纯化

实验三重组腺病毒载体的生物活性(病毒滴度)检测——空斑实验

讨 论

小 结

第二部分AxCA-BDNF对大鼠坐骨神经损伤的治疗作用

实验一实验动物模型的制备

实验二AxCA-BDNF转染在体大鼠损伤坐骨神经基因表达的检测

实验三AxCA-BDNF转染大鼠损伤坐骨神经后神经再生的组织学评价

实验四AxCA-BDNF转染大鼠损伤坐骨神经后辣根过氧化物酶神经逆行示踪

实验五AxCA-BDNF转染大鼠损伤坐骨神经后神经功能恢复的评价——坐骨神经功能指数测定和神经电生理检查

全文总结

致 谢

照 片

参考文献

文献综述一

参考文献

文献综述二

参考文献

文献综述三

参考文献

文献综述四

参考文献

攻读博士学位期间撰写和发表的论文

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摘要

该实验选择携带BDNF cDNA表达片段的重组腺病毒(AxCA-BDNF),采取神经内显微注射的方式,进行该载体的直接转基因治疗.通过原位杂交、免疫组化染色观察重组腺病毒直接转染CSs后基因表达情况;借助对脊髓前角运动神经元和新生神经纤维进行计数,对新生神经髓鞘厚度进行测量,并在电镜下对AxCA-BDNF转染后的坐骨神经和相应脊髓进行超微结构观察等方法,从组织形态学上评价了大鼠坐骨神经损伤处理后脊髓前角运动神经元存活和神经再生情况;应用辣根过氧化物酶(horseradish peroxidese,HRP)逆行示踪技术,显示了神经联接再形成的效果;利用足印分析技术和电生理检查,判定了实验大鼠后肢神经功能的恢复情况.

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