反义人血管生成素重组逆转录病毒载体的构建及其体外功能的初步研究

摘要

该实验采用逆转录病毒作为表达载体,首先,通过RT-PCR合成人ANG成熟肽cDNA,再将cDNA反向插入逆转录病毒载体,获得重组质粒载体,经PA317包装细胞包装假病毒转染目的细胞A549,利用逆转录病毒转染效率高,外源基因表达稳定等优点,以达到抑制细胞内ANG蛋白的表达,从而是在根本上阻断肿瘤细胞分泌ANG所引起的异常血管增生,达到抑制肿瘤发展与转移的目的,为将反义ANG基因应用于抗血管生成的基因治疗奠定了基础.1.应用RT-PCR成功扩增出人ANG的cDNA,克隆于T-载体中,并经测序鉴定.2.携带人反义ANG的逆转录病毒载体构建成功,通过包装细胞包装后获得了具有感染性的假病毒颗粒.3.重组反义ANG逆转病毒体外感染体外感染A549细胞后能有效抑制ANG蛋白的表达,为进一步研究其体内效应奠定了基础.

目录

英文缩写一览表

摘要

前 言

第一部分反义ANG重组逆转录病毒载体的构建

材料和方法

结 果

讨论

第二部分反义ANG重组逆转录病毒的包装与体外效应的研究

材料与方法

结 果

讨 论

全文结论

致 谢

照 片

参考文献

文献综述:基因治疗的研究进展

参考文献

研究生期间发表的论文