不同生长因子对常温下体外灌流兔肾影响的实验研究

摘要

慢性肾功能衰竭是临床上常见的多发病症，严重影响着患者的生活质量，肾移植仍是目前治疗慢性肾衰的重要方法。临床上对供肾的需求不断上升，而目前一方面可供移植的肾脏严重短缺，另一方面由于离体肾脏保存方法的局限，常有供肾的浪费。因此，研究、寻找和使用最佳保存方法，以降低移植肾脏的热缺血损伤，延长离体肾脏保存时间，提高供肾的利用率已成为我们面临的一项亟待解决的难题。本实验旨在探讨不同浓度不同生长因子对常温下体外灌流肾脏的影响。 材料和方法 选择36只健康成年新西兰白兔，按照灌注液不同，随机分为以下6组：无生长因子对照组(A组)、低剂量表皮生长因子组(B组)、高剂量表皮生长因子组(C组)、低剂量肝细胞生长因子组(D组)、高剂量肝细胞生长因子组(E组)、小牛血清组(F组)(经56℃30min灭活补体)，每组6只肾，1只用来观测最长保存时间，另外5只用于检测各项生化指标及观察光镜下组织学改变和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。无菌条件下取其左肾灌流，用等量RPMI1640培养基稀释的肝素抗凝自体血灌流，不同组加入不同浓度的不同生长因子，于灌流24、48、65小时分别测肾静脉流出液乳酸脱氢酶(LDH)活性，钠、钾浓度，尿β-N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶(NAG)活性以监测肾功能，并作光镜下肾组织结构改变和增殖细胞核抗原表达的检测从而了解肾组织形态学改变及肾组织损伤程度以评估不同浓度不同生长因子对体外灌流兔肾的影响。 结果 1.小牛血清组(F组)肾脏灌流保存时间最长，达80.65小时。 2.无生长因子组(A组)肾静脉流出液乳酸脱氢酶活性，钾浓度及尿β-N-乙酰-氨基葡萄糖苷酶活性随灌流时间延长显著增加(P＜0.01)；表皮生长因子(B、C组)两组上述生化指标于24小时后随灌流时间延长也显著增加(P＜0.01)，但增加幅度小于A组，其中C组的增加幅度又略低于B组；肝细胞生长因子(D、E组)两组24、48小时上述生化指标无显著增加，65小时虽也显著增加(P＜0.01)，但增加幅度低于A组，也低于B、C两组，其中E组的增加幅度又略低于D组；F组以上生化指标于24、48小时无显著增加，也于65小时显著增加(P＜0.01)，但增加幅度低于其它各组。 3.无生长因子组(A组)肾静脉流出液钠浓度随灌流时间延长显著降低(P＜0.01)；表皮生长因子(B、C组)两组肾静脉流出液钠浓度于24小时后随灌流时间延长也显著下降(P＜0.01)，但下降幅度小于A组，其中C组的下降幅度又略低于B组；肝细胞生长因子(D、E组)两组24、48小时肾静脉流出液钠浓度无显著下降，65小时虽也显著下降(P＜0.01)，但下降幅度低于A组，也低于B、C两组，其中E组的降低幅度又略低于D组；F组肾静脉流出液钠浓度24、48小时无显著下降，也于65小时显著下降(P＜0.01)，但下降幅度低于其它各组。 4.肾脏灌流24小时光镜下各组肾组织结构基本正常，D、E、F组48小时肾组织结构也基本正常；A、B、C组于灌流48小时，D、E、F组于灌流65小时均可见到肾小管上皮细胞胞浆混浊肿胀；A、B、C组于灌流65小时，可见到肾小管上皮细胞胞浆中空泡形成。 5.各组灌流24小时，以及D、E、F组48小时细胞核增殖抗原基本不表达；A、B、C组灌流48小时以及D、E、F组灌流65小时细胞核增殖抗原呈轻度表达；A、B、C组灌流65小时细胞核增殖抗原表达明显。 结论 1.含有小牛血清的灌流液，用于常温下离体肾脏灌流保存效果最好，能延缓肾脏功能损伤，显著延长保存时间，效果优于其他各组。 2.肝细胞生长因子和表皮生长因子对灌流保存肾脏也有一定的保护作用，并呈剂量依赖关系。 3.本实验建立了常温下肾脏离体灌流保存的方法，可保存肾脏80小时以上。

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文献综述 器官保存方法的研究进展

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