以乙肝病毒衣壳为载体的ps2-DTA对肝癌细胞特异性杀伤作用的实验研究

摘要

目的: 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)具有嗜肝性，其外衣壳(hepatitisB virus envelope，HBVE)某些蛋白如前S1蛋白(pre S1)等与HBV的嗜肝性有关。本研究通过β-丙内脂法制备乙肝病毒衣壳(HBVE)，以其作为白喉毒素A片断基因(DTA)的基因转移载体，观察和探讨以HBVE为载体的ps2-DTA在体外培养肝癌细胞中的特异表达情况及其对肝癌细胞的杀伤作用。 方法: 1．采用PEG 8000病毒浓缩法从能持续产生HBV的Hep G2.2.15细胞上清液中提取HBV，用β-丙内脂法制备HBVE。 2．用Elisa法、透射电镜对HBV、HBVE、HBVDNA分别进行表面蛋白保留情况及形态的检测。 3．将HBVE包裹ps2-DTA制备成HBVE-DTA混合物，分别将HBVE-DTA及脂质体-DTA转染人肝母细胞瘤细胞株HepG2细胞，并将HBVE-DTA分别转染HepG2细胞及作为对照的人肺腺癌细胞株A549、人皮肤成纤维细胞株FB，通过RT-PCR和细胞免疫组化染色检测DTA的表达、TUNEL法检测细胞凋亡、台盼蓝拒染实验比较细胞存活率、细胞形态和生物化学等指标观察其对肝癌细胞的杀伤作用。 结果: 1．对HBV、HBVE、HBVE-GFP的检测： (1)Elisa法、PCR法检测结果可见，所制备的HBVE能保留HBV的表面蛋白HBsAg、pre S1。 (2)透射电镜观察三者均为球形颗粒，HBV、HBVE-GFP中可见电子致密物，HBVE中未见电子致密物。 2．以乙肝病毒衣壳为载体的ps2-DTA转染后观测到： (1)在HepG2中，DTA在mRNA和蛋白水平的表达量显著增加。 (2)在HepG2细胞分裂相少见、存活率低且生长缓慢，对照细胞却很快进入对数生长期。 (3)HepG2细胞凋亡指数比对照细胞显著增加。 结论: 1．我们用β-丙内脂法成功地制备了HBVE。 2．所制备的HBVE含有HBV嗜肝性因素Pre S1，透射电镜观察HBVE中未见电子致密物。 3．HBVE-DTA能够有效地在HepG2细胞中表达，其表达效率及荧光强度显著高于脂质体包裹DTA。 4．用HBVE-DTA转染HepG2，表达效率明显高于其它细胞，并对HepG2细胞有特异性杀伤作用。

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文献综述：肿瘤分子靶向治疗

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