龙腾胶囊有效提取物的抗炎作用及其机制的初步研究

摘要

类风湿性关节炎(RheumatoidArthritis，RA)是以关节滑膜慢性炎症为主的自身免疫性疾病，引起关节肿痛，继而导致软骨破坏，关节间隙变窄，晚期关节畸形，最终出现不同程度的残疾。近年来虽然该领域研究取得了明显进展，但仍无根本性突破；一是其病因至今仍然未明，二是临床上仍缺乏副作用小(传统的甾体、非甾体抗炎药用作抗RA治疗时，均具有明显的毒副反应)、疗效又佳的治疗药物。临床现状迫切需求寻找和创制有效低毒的新型抗RA药物。天然药物及中医中药是我国新药开发的优势领域。龙腾胶囊是一种民间古方，用于治疗类风湿性关节炎具有良好疗效，但其作用机制不清，且缺乏较系统规范的药理学评价。为此，本研究在成功制备龙腾胶囊有效提取物(COT)的基础上，采用多种炎症与疼痛动物模型，从整体、细胞及分子等水平对COT的抗炎、免疫调节作用及其作用机制进行了研究，旨在为寻找有效、低毒的新型抗RA药物及龙腾胶囊的进一步开发应用提供实验资料和理论依据。 方法 1、在角叉菜胶诱导的大鼠足爪肿胀模型中，通过测量足爪致炎前后的周长和重量，计算统计足爪的肿胀率和增重率，比较各组之间的对炎症的抑制率的差别，以判别COT对急性炎症的影响。 2、在大鼠棉球肉芽肿组，通过测量致炎后肉芽肿的重量，比较各组的治疗效果，以了解COT对慢性炎症及炎症后期病变的影响。 3、通过在大鼠急性腹膜炎模型上进行的毛细血管通透性实验，检测醋酸致炎大鼠腹腔中液体伊文斯兰渗出量，而比较各组急性腹膜炎大鼠的毛细血管通透性。 4、在大鼠热板实验及扭体实验中，分别观测大鼠舔后足动作和扭体次数，而比较各组大鼠痛阈的改变和药物的镇痛作用。 5、在大鼠佐剂性关节炎模型中，①通过佐剂性关节炎评分判定COT的抗炎效果；并在COT给药后21天，处死实验动物，运用HE染色，通过大鼠滑膜病理5级评分法，评定药物对滑膜病变的影响；以观察对免疫性炎症及关节局部病变的影响；②运用HE染色对各组实验大鼠胃粘膜进行了病理观察，以比较COT与阳性对照药吲哚美辛对大鼠胃粘膜损害效应的差异。 6、在大鼠佐剂性关节炎模型，于COT给药药后21天，运用ELISA方法测量血清中细胞因子IL-1β、IL-2的水平；运用流式细胞技术，处死模型后，获得脾细胞，测量实验动物的淋巴细胞在体外的增值水平及T淋巴细胞亚群的变化，如CD4+/CD8+。 结果 COT在角叉菜胶诱导的模型中降低了大鼠的足爪肿胀率和增重率，肿胀率由33％左右降为23％左右，增重率由23％左右降为17％左右；在棉球肉芽肿模型组，使用COT后，肉芽肿的重量减低了38％，由63±5.7mg降为39±4.1mg；在佐剂性关节炎的模型中，COT对关节炎有明显的抑制作用，使滑膜病变也有明显改善，有效抑制关节滑膜炎细胞浸润、细胞增生，关节炎评分降低，呈剂量依赖性变化。与炎症组比较，药物可降低IL-1β含量，升高IL-2含量，使细胞因子含量接近正常水平；CD8+细胞增多，CD4+/CD8+的比值减少；通过在大鼠毛细血管通透性实验，COT显著抑制醋酸致大鼠急性腹膜炎的毛细血管通透；在大鼠热板实验及扭体实验中，COT治疗组大鼠的痛阈显著提高，扭体次数减少。 胃粘膜的病理观察发现，吲哚美辛组胃粘膜出现明显的溃疡、糜烂，病变严重。与吲哚美辛组比较，COT治疗组未见明显胃粘膜损害，仅在COT高剂量组观察到个别动物出现胃粘膜散在炎性细胞浸润。 上述结果表明，COT具有良好抗炎作用，其疗效与吲哚美辛相近，但副作用小，具有良好的应用前景。 结论 1.龙腾胶囊有效提取物(COT)[0.5～4.5g(以生药计)/kg，灌胃]对大鼠角叉菜胶诱导的足爪肿胀、棉球肉芽肿和佐剂性关节炎等多种炎症模型具有显著的抑制作用； 2.COT能明显降低大鼠急性腹膜炎时毛细血管通透性，并可提高痛阈水平。 3.COT的抗炎作用机制与抑制IL-1β生成、调节IL-2以及CD4+/CD8+淋巴细胞平衡有关。 4.龙腾胶囊与传统的非甾体类抗炎代表药物吲哚美辛相比，无明显的胃肠损害副作用。

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摘要

前言

第一部分 龙腾胶囊有效提取物对急、慢性炎症的影响

第二部分 龙腾胶囊有效提取物抗炎作用机制研究

全文结论

致谢

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参考文献

文献综述

研究生在读期间撰写的文章