大鼠大脑中动脉闭塞认知功能改变及干预的实验研究

摘要

背景和目的： 缺血性脑血管病是一种严重危害人类健康及生存的疾病，缺血性脑血管病导致的偏瘫及认知功能障碍成为影响人类生存质量的最大障碍。临床上大脑中动脉闭塞导致的脑梗死占缺血性脑血管病的绝大部分。既往人们往往重视大脑中动脉闭塞(middlecerebralarteryocclusion，MCAo)导致的神经功能(如：偏瘫等)障碍，而对MCAO后血管性认知障碍关注较少(vascularcognitiveimpairment，VCI)。血管性认知障碍患者逐年增多，严重影响患者生活质量。目前VCI以药物治疗为主，主要包括乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂。但是这类药物具有毒副作用大，昂贵的弊端，很难在临床上普遍使用。所以寻找一种有效的治疗血管性认知障碍的药物尤为重要。近年来5-羟色胺等单胺类神经递质与记忆的密切关系已经逐渐受到人们的重视。研究证明临床应用5-羟色胺再摄取抑制剂(SSRIs)药物能够有效改善认知功能障碍，西酞普兰是SSRIs类药物中的一种，可是西酞普兰在改善卒中后认知障碍方面的效果还不甚清楚。本实验选择Longa等法改良复制MCAo模型动物，观察认知功能的变化，同时给予盐酸多奈哌齐(Donepezil)、西酞普兰(Cipramil)两种药物进行干预，观察两种药物对MCAo动物认知功能变化的影响，探讨大脑中动脉闭塞与认知功能障碍的关系，对比研究两种不同药理作用的药物对大脑中动脉闭塞导致的认知功能障碍的作用，旨在为为临床VCI的干预提供依据。 方法： 采用ZeaLonga等法改良复制MCAo模型动物，126只SD大鼠随机分为7组，每组18只：假手术组(A组)、缺血30min对照组(Ba组)、缺血30min盐酸多奈哌齐干预组(Ca组)、缺血30min西酞普兰干预组(Da组)、缺血90min对照组(Bb组)、缺血90min盐酸多奈哌齐干预组(Cb组)、缺血90min西酞普兰干预组(Db组)，以1.65mg/kg.d盐酸多奈哌齐、6.25mg/kg.d西酞普兰灌胃给药，持续14天。假手术组、对照组大鼠以每只2ml/d生理盐水灌胃，历时相同时间。 治疗2周后，将脑制成的脑片，进行TTC染色观察其梗塞情况。应用经典的Morris水迷宫实验、检测事件相关电位中的P300潜伏期的变化，观察治疗后大鼠认知功能的变化。检测大鼠海马单胺类神经递质的改变，观察认知功能障碍后大鼠海马单胺类神经递质的变化，评判两种药物干预措施对海马单胺类神经递质的影响。免疫组化染色观察大鼠海马胆碱能神经元的损害以及干预后的变化。 结果： 1、大鼠P300潜伏期的变化：假手术组大鼠P300潜伏期为250.00±12.71ms，缺血90min、30min对照组大鼠P300潜伏期比假手术组明显延长(P＜0.01)。缺血30min两药物干预组与其对照组大鼠P300潜伏期相比没有明显差异(P＞0.05)，缺血30min两药物干预组之间比较亦无明显差异(P＞0.05)。缺血90min两药物干预组大鼠P300潜伏期与其对照组大鼠相比均显著缩短(P＜0.01)，且盐酸多奈哌齐组大鼠P300潜伏期比西酞普兰组大鼠明显缩短(P＜0.01)。缺血90min对照组、西酞普兰组及盐酸多奈哌齐组与其相应的缺血30min组P300潜伏期相比明显延长(P＜0.01，P＜0.05)。 2、大鼠水迷宫实验的平均逃避潜伏期的变化：缺血90min、30min对照组大鼠平均逃避潜伏期与假手术组比较明显延长(P＜0.01，P＜0.05)。缺血30min两药物干预组逃避潜伏期与其对照组无明显差异(P＞0.05)。缺血90min两药物干预组与其对照组比较明显缩短(P＜0.01)。实验3、4、5天缺血90min盐酸多奈哌齐组平均逃避潜伏期与西酞普兰组比较明显缩短(P＜0.05)。缺血90min对照组、盐酸多奈哌齐组、西酞普兰组平均逃避潜伏期与其相对应缺血30min组相比均显著延长(P＜0.01)。 3、大鼠平台象限游泳时间及占总游泳时间百分比(tP/tT)的变化：缺血90min、30min对照组大鼠tP/tT百分比明显小于假手术组(P＜0.01，P＜0.05)。缺血30min两药物干预组tP/tT百分比与其对照组无明显差异(P＞0.05)。缺血90min两药物干预组的百分比值与其对照组相比显著增加(P＜0.05)，且盐酸多奈哌齐组tP/fT显著大于西酞普兰组(P＜0.05)。缺血90min对照组、盐酸多奈哌齐组、西酞普兰组的tP/tT比值均显著小于其相应缺血30min组(P＜0.05，P＜0.01)。 4、大鼠平台象限游泳距离及占总游泳距离百分比(dP/dT)的变化：缺血90min、30min对照组大鼠dP/dT百分比明显小于假手术组(P＜0.01，P＜0.05)。缺血30min两药物干预组dP/dT百分比与其对照组无明显差异(P＞0.05)。缺血90min两药物干预组的百分比值与其对照组相比显著增加(P＜0.05)，且盐酸多奈哌齐组dP/dT显著大于西酞普兰组(P＜0.05)。缺血90min对照组、盐酸多奈哌齐组、西酞普兰组的dP/dT比值均显著小于其相应缺血30min组(P＜0.05，P＜0.01)。 5、大鼠海马单胺类神经递质的变化：缺血90min、30min对照组大鼠海马的NE、DA和5-HT的含量与假手术组相比明显降低(P＜0.05)。缺血30min两药物干预组大鼠海马的NE、DA和5-HT'的含量也呈降低趋势但与其对照组比较则无明显差异(P＞0.05)，且两药物干预组之间亦无明显差异(P＞0.05)。缺血90min两药物干预组大鼠海马NE、5-HT和DA的含量比其对照组明显升高(P＜0.01，P＜0.05)，且盐酸多奈哌齐组大鼠海马NE、DA和5-HT的含量较西酞普兰组明显升高(P＜0.05，P＜0.01)。缺血90min对照组、盐酸多奈哌齐组和西酞普兰组大鼠海马NE、DA和5-HT的含量明显比其相应缺血30min组降低(P＜0.05，P＜0.01)。 6、大鼠ChAT免疫组织化学染色的变化：免疫组化染色观察发现假手术组大鼠海马胆碱能神经元密集排列，形态规则。对照组大鼠海马胆碱能神经元排列稀疏、紊乱，并且胆碱能神经元出现固缩深染，细胞结构不清等改变，缺血30min对照组大鼠的病变程度较轻，缺血90min对照组大鼠的病理程度重。缺血90min两药物干预组大鼠海马胆碱能神经元与对缺血90min照组大鼠比较明显增多，且盐酸多奈哌齐组与西酞普兰组大鼠海马胆碱能神经元比较亦明显增多。 结论： 1、大脑中动脉闭塞可以造成认知功能下降，并且随着缺血时间的延长，认知功能损害越重。 2、两种药物干预均可不同程度的改善认知功能障碍。针对不同缺血时间的大脑中动脉闭塞所致的认知功能障碍，两种药物干预结果各有不同。对于缺血90min导致的认知功能障碍，盐酸多奈哌齐干预后认知功能改善程度更大，优于西酞普兰药物干预。对于缺血30min导致的认知功能损害，两种药物干预对认知功能改善的疗效没有明显差异。两种不同干预方式的作用机理可能与改善海马神经元结构/功能有关。

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文献综述血管性痴呆的临床治疗进展

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