五没食子酰基葡萄糖抑制卵巢癌细胞增殖及其机制的研究

摘要

五没食子酰基葡萄糖（pentagalloylglucose，PGG）是一种天然多酚化合物，自然界中分布及其广泛。之前的研究表明PGG 具有多种生物活性，具有治疗和预防一些重要疾病如炎症、肿瘤以及糖尿病的潜能，对宿主没有毒副作用。卵巢癌是主要的妇科肿瘤之一，目前没有有效的治疗药物。本课题选取不同的卵巢癌细胞株作为实验对象，研究五没食子酰基葡萄糖对卵巢癌细胞增殖的影响，并初步探讨可能的分子机制。
　　 实验方法：
　　 1.使用MTT 实验研究PGG在体外对卵巢癌HO-8910、HO-8910PM与SKOV-3细胞增殖的影响，使用普通光学倒置显微镜观察PGG 处理后细胞形态改变。
　　 2.使用PI 单染流式细胞检测分析PGG对卵巢癌细胞细胞周期分布影响；使用Hoechst 染色PGG 处理之后的细胞，在荧光显微镜下观察细胞核形态的变化，看是否出现凋亡特征，然后使用AnnexinV-FITC/PI 双染流式细胞分析检测PGG对卵巢癌细胞凋亡率的影响。
　　 3.Western blot 用于检测细胞内Caspase家族成员的剪切情况，出现Caspase 相应的剪切小片段证明PGG 激活了细胞内Caspase 凋亡信号通路；Western blot还用于检测NF-κB 转录因子的P65 亚基与其抑制蛋白IκB在细胞质与细胞核中的分布变化，确定PGG对NF-κB信号通路的影响。
　　 4.RT-PCR 用来研究PGG对NF-κB的靶基因bcl-2、bcl-xl、ciap-1、ciap-2、survivin、niap、xiap、cyclinD1转录影响，这些基因是肿瘤细胞中的促存活基因。
　　 实验结果
　　 1.PGG能以时间与浓度依赖的方式抑制卵巢癌细胞HO-8910、HO-8910PM与SKOV-3 体外增殖，当PGG 剂量大于20μM，或作用时间达到48 h时，PGG对卵巢癌细胞的抑制呈现出明显的时间与剂量依赖关系（P<0.05）。
　　 2.PGG 改变三株卵巢癌细胞的细胞周期分布，诱导卵巢癌HO-8910与HO-8910PM细胞凋亡。随着PGG 处理剂量增加与作用时间延长，细胞周期向S-期富集。Hoechst 染色显示，PGG 诱导了HO-8910细胞的核发生凋亡样形态改变，对SKOV-3细胞膜与细胞核形态没有影响；AnnexinV-FITC 染色结合流式细胞分析显示PGG 诱导HO-8910与HO-8910PM细胞凋亡出现早期凋亡，但是对SKOV-3细胞凋亡影响较小。
　　 3.PGG 处理之后卵巢癌细胞内出现了几个Caspases家族成员的活性形式，出现相应的c-Caspase-9、3、7；PGG 虽然上调了外源性凋亡途径中上游的肿瘤坏死因子受体表达，但是抑制了Caspase-8的剪切。
　　 4.PGG 处理卵巢癌细胞抑制转录因子NF-?B的P65 亚基核转位，伴随着其抑制性蛋白I?B在细胞质中积累；相应地，PGG下调了NF-?B的几个靶基因bcl-2、bcl-xl、surviving、niap、xiap、cyclinD1的mRNA表达。但是上调了ciap-1、ciap-2的mRNA的表达，对bax的mRNA表达没有影响。
　　 结论
　　 PGG能抑制卵巢癌细胞的体外增殖，其机制涉及PGG 诱导细胞周期S-期阻滞与诱导细胞凋亡。PGG 可能通过抑制细胞内致癌转录因子NF-κB的活性，下调其凋亡抑制基因的表达，诱导细胞进入内源性Caspase 凋亡途径，从而导致细胞死亡。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章 序言

第二章 PGG 抑制卵巢癌细胞体外增殖

第三章 PGG 诱导卵巢癌细胞周期阻滞与凋亡

第四章 PGG 诱导卵巢癌HO-8910 细胞凋亡的Caspase 途径

第五章 PGG 对卵巢癌细胞NF-κB 信号及其靶基因表达的影响

第六章 总结与展望

参考文献

文献综述

攻读学位期间科研情况与所受奖励

附录

致谢