幽门螺杆菌HpaA-VacA融合蛋白卵黄抗体的制备及生物活性研究

摘要

目的：通过基因工程方法构建幽门螺杆菌黏附素（ HpaA）、细胞空泡毒素（VacA）及HpaA-VacA融合蛋白作为免疫原，免疫蛋鸡制备特异性卵黄抗体（IgY），并研究其生物活性，为Hp感染的治疗与预防开辟了一条新路径，同时也为制备抗Hp感染的制剂奠定基础。
　　方法与结果：1.采用PCR方法分别克隆幽门螺杆菌HpaA、VacA及HpaA-VacA融合基因。克隆载体酶切和测序结果均显示，Hp HpaA、VacA和HpaA-VacA融合基因成功克隆到pGEM-3Z质粒中。2.通过DNA重组技术分别构建Hp HpaA、VacA和HpaA-VacA融合基因的原核表达系统。SDS-PAGE结果表明，以上原核表达系统构建成功，且HpaA、VacA和HpaA-VacA融合蛋白均高效表达。3.通过亲和层析法纯化HpaA、VacA及HpaA-VacA融合蛋白，SDS-PAGE分析其纯度，Western blot鉴定其免疫学活性。结果显示，纯化后的三种重组蛋白纯度均达到90％以上，且均能够被Hp感染病人的血清所识别，即三种融合蛋白都具有良好的免疫学活性。4.以纯化的HpaA、VacA及HpaA-VacA融合蛋白分别免疫蛋鸡，分离提纯IgY，鉴定其生物学活性。SDS-PAGE测定IgY纯度均为85％左右；Western blot显示IgY都具有良好的免疫特异性即能与相应的抗原发生特异性结合；间接ELISA结果显示，HpaA-IgY效价为1:12800；VacA-IgY效价为1:12800；HpaA-VacA-IgY效价为1:6400；而HpaA-VacA-IgY分别与HpaA和VacA抗原反应，效价可达1:6400和1:3200。
　　结论：本文主要通过基因工程及动物免疫的方法成功制备出高效价的抗幽门螺杆菌的特异性HpaA-IgY、VacA-IgY、HpaA-VacA-IgY，并研究比较了其生物学活性，证实其均具有良好的免疫学活性，从而为制备集预防与治疗为一体的抗幽门螺杆菌感染的制剂奠定基础。

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中文摘要

英文摘要

前言

实验流程

第一章 幽门螺杆菌HpaA、VacA和融合基因HpaA-VacA克隆

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

第二章 HpaA、VacA和融合基因HpaA-VacA原核表达载体构建及蛋白表达活性研究

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

第三章 卵黄抗体IgY的制备及其生物学活性测定

一、材料与方法

二、结果

三、讨论

全文总结

1 创新点

2 研究展望

参考文献

附 录（Appendix）

附录一 缩略词中英文对照

附录二 硕士期间发表的论文

附录三 序列图

致谢