EAN中促红细胞生成素是炎症诱导的内源性保护分子

摘要

炎症是机体的一种保护性反应，在防御和清除体内外各种致病因素上发挥了重要作用，但是持续过强的炎症反应也会造成机体的组织细胞损伤。研究已经证明，炎症性损伤参与机体多种病理生理过程，影响了多种的疾病发生发展。由于炎症同时具有组织损伤功能，机体也存在炎症反应诱导的内源性反馈机制，以调控和限制炎症在合理水平。研究阐明这种内源性的炎症调控机制对于炎症反应的调控有重要的理论和实际意义。
　　 促红细胞生成素(EPO)是主要由肾脏合成并分泌的造血因子，是体内最重要的促造血激素。EPO的作用是受体依赖的，且EPO的促造血作用由表达在造血祖细胞上的EPO受体(EPOR)的同源二聚体化所介导。近年来研究发现，EPOR不仅表达在造血系统，而且表达在许多非造血系统如神经系统，且神经系统发生损伤后EPO/EPOR的表达明显增加，这些发现提示EPO具有除造血以外的其他生物学活性。最近的研究证实，EPO在无论在体内还是体外都具有强大的组织和细胞保护作用，不同于EPO的造血功能，介导细胞保护作用的受体是EPOR和commonβ链组成的异源二聚体。更有趣的是，目前在炎症细胞如巨噬细胞和淋巴细胞表面也都发现有EPOR的表达，这一发现直接提示我们EPO可能影响炎症细胞功能，具有炎症调控功能。多种研究已经发现外源性给予EPO具有炎症调控功能，并且EPO及其受体表达受到炎症因子等的调控。据此，我们推测EPO可能是一种由炎症所诱导的内源性细胞保护和炎症调控的分子，是机体炎症调控的内源性机制之一。因此我们以大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)为模型进行了研究。
　　 大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)是一种CD4+T细胞为主介导的外周神经自身免疫性脱髓鞘性炎症模型。EAN发病过程具有单向性和自限性的特点，在疾病前期，EAN进展达到疾病高峰期，炎症性损伤最为严重；但在疾病后期，各种内源性的保护机制参与了炎症的消退，从而促使疾病得以自发康复。这一重要特点使其成为研究炎症内源性反馈调节机制的良好模型。其次，参与EAN炎症反应的细胞较为明确，除CD4+T淋巴细胞外，巨噬细胞和雪旺氏细胞也参与其中并发挥重要的作用，这对我们研究调控分子对各炎症细胞的影响提供了很大的便利。
　　 本研究中我们以大鼠EAN为炎症模型，研究了EAN诱导炎症中内源性EPO的表达，体外EPO对的炎症细胞功能的影响和对雪旺氏细胞的保护，以及外源性EPO对EAN的治疗作用和可能机制。
　　 具体而言，在第一部分实验中，我们建立了大鼠EAN炎症模型，并通过Real-timePCR和免疫组化的方法检测了EAN外周神经和淋巴结中EPO和EPOR的表达情况。我们发现EPO/EPOR在EAN外周神经和淋巴结中的表达是增加的，而且与EAN炎症的严重程度呈平行关系，提示炎症诱导了内源性EPO的表达，内源性EPO的表达可能是炎症的一种反馈性调控机制。
　　 在第二部分实验中，我们研究了体外EPO对巨噬细胞、雪旺氏细胞和淋巴细胞在细胞增殖、凋亡、炎症因子分泌等方面的影响，我们发现对于雪旺氏细胞，EPO促进其增殖和髓鞘分泌、减少其凋亡和炎症因子的表达；对于巨噬细胞，EPO抑制其炎症因子的分泌，促进其吞噬功能；对于淋巴细胞，EPO抑制了其激活后的增殖反应。这些体外实验结果表明EPO具有细胞保护和炎症调控功能，提示我们外源性EPO在EAN动物体内也可能有相似的组织保护和炎症调控功能。
　　 在第三部分实验中，我们使用外源性EPO对EAN大鼠进行了治疗，发现EPO显著缩短了EAN病程、减低了神经运动功能障碍严重程度。外周神经免疫组化和定量PCR结果显示EPO减少了外周神经的脱髓鞘、抑制了炎症细胞的浸润，减少了促炎因子的表达。脾脏流式分析结果表明EPO显著抑制了脾脏PBMC中CD4+T细胞比例，并且抑制了Th1型细胞，促进了Treg型细胞的分化。淋巴结定量PCR分析结果提示EPO抑制了淋巴结中Th1/Th17型细胞的分化，促进了Treg型细胞的分化。这些结果表明EPO在体内确实能够发挥强大的组织保护和炎症调控功能。
　　 上述研究表明炎症诱导了内源性EPO的表达，EPO是炎症诱导的内源性有细胞保护和炎症调控分子，是机体炎症调控的一种机制。外源性EPO的使用作为对内源性EPO的一种加强和补充，可以发挥组织保护和炎症调控的作用，也为炎症性疾病的治疗提供新的方法和思路。

目录

文摘

英文文摘

缩略英文缩写

前 言

第一部分 大鼠实验性自身免疫性神经炎模型的建立以及内源性促红细胞生成素的表达

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分 促红细胞生成素体外细胞保护和炎症调控功能研究

前 言

材料与方法

结 果

讨 论

参考文献

第三部分 促红细胞生成素对大鼠实验性自身免疫性神经炎的治疗作用及其机制

前 言

材料与方法

结 果

讨论

参考文献

全文总结

致谢

文献综述 Erythropoietin and its analogues in the nervous system：from bench to bedside

Reference

攻读硕士学位期间发表文章、参加会议及申请专利