人真皮干细胞标记示踪方法的比较研究

摘要

研究背景：
　　 干细胞具有自我更新和多向分化潜能的特性。利用干细胞移植进行疾病治疗已成为干细胞研究的热点。干细胞的标记和示踪能够为阐明干细胞在移植受体内的定植、分布、迁移和分化等生物学行为提供重要依据，对干细胞移植研究具有重要意义。本课题拟探讨利用荧光染料PKH26、核酸标记物BrdU以及人源性细胞特异性识别抗体等三种方法用于干细胞体内示踪，分析三种方法的优缺点，为研究干细胞在体移植后的生物学评价提供依据。
　　 研究方法：
　　 第一部分，以人真皮干细胞为研究对象，观察荧光染料PKH26、核酸标记物BrdU以及三种人源性细胞特异性识别抗体来体外标记和检测干细胞的效果。
　　 第二部分，以不同剂量全身辐射C57BL/6J小鼠动物损伤模型作为受试体，以2×106个细胞/只尾静脉移植经不同方法标记的人真皮干细胞，于不同时间点取材，应用普通光学显微镜或荧光显微镜观察各种方法检测细胞在组织器官中的分布情况。
　　 研究结果：
　　 本研究主要结果如下：
　　 1.经BrdU体外标记的人真皮干细胞经静脉移植受试小鼠后，可通过抗BrdU抗体检测到人真皮干细胞在受试小鼠肺内的定植；
　　 2.经PKH26体外标记的人真皮干细胞经静脉移植受试小鼠后，未能检测到人真皮干细胞在受试小鼠各个脏器的定植情况；
　　 3.本研究中所尝试的三种商品化的人源性细胞特异性识别抗体，其中小鼠抗人β-2-Microglobulin抗体(Santa Cruz，sc-80668)和小鼠抗人endoglin抗体(Dako，M3527)在体外均不能特异性识别人源性细胞。小鼠抗人nuclei抗体(Millipore，MAB1281)能够在体外特异性识别人源性细胞，但人真皮干细胞经静脉移植受试小鼠后，通过小鼠抗人nuclei抗体未能检测到人真皮干细胞在受试小鼠各个脏器的定植情况。
　　 结论：
　　 本课题研究中，我们通过利用荧光染料PKH26、核酸标记物BrdU以及三种人源性细胞特异性识别抗体来体外标记干细胞并进行体内示踪，比较了三种标记方法的优缺点。本课题取得的主要研究结论包括：
　　 1.核酸标记物BrdU具有较高的体外标记效率和较为稳定的体内示踪特性，可作为干细胞体外标记及体内示踪方法应用于干细胞移植研究；
　　 2.荧光染料PKH26具有较高的体外标记效率，但用于干细胞体内示踪时，其分辨率和信号强度等问题不够理想；
　　 3.基于人源性细胞特异性识别抗体的检测方法在研究干细胞体内示踪的过程中很大程度上受限于抗体质量和稳定性的影响，本研究所采用的小鼠抗人nuclei抗体(Millipore公司)、小鼠抗人β-2-Microglobulin抗体(Santa Cruz公司)、小鼠抗人endoglin抗体(Dako公司)均未获得理想的结果。