大鼠脊髓损伤后神经元线粒体自噬及其相关蛋白BNIP3、NIX的表达

摘要

目的：
　　研究大鼠脊髓损伤后脊髓组织神经元自噬与线粒体自噬的表达变化以及线粒体自噬相关蛋白BNIP3、NIX和p53在大鼠脊髓损伤后不同时间点的表达变化及意义,探讨新的脊髓损伤继发性神经元死亡发生机制。
　　方法：
　　健康雄性SD大鼠,体重200-220g,取16只随机分为假手术组(n=8)和脊髓损伤后24h组(n=8),用于透射电镜和免疫荧光检测。另取48只随机分为假手术组,损伤后6h、24h、48h、72h、96h组(n=8),用于荧光定量PCR(real-time PCR)和Western blot检测。Allen’s法建立脊髓损伤模型,假手术组仅作T10椎板切除。各组在术前及术后6h、24h、48h、72h、96h采用BBB评分法评价大鼠后肢运动功能变化情况;透射电镜观测损伤组织的超微结构;荧光定量PCR检测BNIP3mRNA的表达变化;Western blot检测LC3、BNIP3、NIX、p53的表达变化;免疫荧光检测LC3Ⅱ、BNIP3的表达及定位。
　　结果：
　　1、假手术组中神经元细胞核膜完整,胞质中粗面内质网以及线粒体等细胞器形态正常,未见自噬体及线粒体自噬体;脊髓损伤后24h观测到神经元线粒体肿胀、空泡的形成,高倍镜下检测到神经元自噬体及线粒体自噬体。
　　2、荧光定量PCR检测发现BNIP3mRNA的表达量在损伤后6h明显升高,并在24h达到高峰(p<0.01)。
　　3、Western blot检测发现LC3-II/LC3I的水平24h后明显升高,96h仍有较高表达(p<0.01);BNIP3、p53的表达量在6h明显升高,并在24h达到高峰(p<0.01),96h下降至损伤前水平;NIX的表达量在6h后明显升高(p<0.01),96h仍有较高表达(p<0.01)。
　　4、免疫荧光显示LC3II、BNIP3在脊髓损伤后24h神经元中高表达。
　　结论：
　　1.大鼠脊髓损伤后神经元自噬以及线粒体自噬被诱导激活。
　　2.线粒体自噬相关蛋白BNIP3、NIX在脊髓损伤后表达增高并可能参与线粒体自噬的诱导。

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缩略语表

英文摘要

中文摘要

1前言

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 实验方法

3结果

3.1 大鼠运动功能的检测

3.2 透射电镜下大鼠脊髓组织的超微结构

3.3 Western blot 检测大鼠脊髓损伤后不同时间点LC3的表达变化

3.4 免疫荧光双标检测 LC3-II 的表达及定位

3.5 大鼠脊髓损伤后不同时间点BNIP3 mRNA的相对表达量

3.6 Western blot 检测大鼠脊髓损伤后不同时间点BNIP3、NIX、p53的表达变化

3.7 免疫荧光双标检测 BNIP3 的表达及定位

4讨论

4.1 神经元线粒体自噬在脊髓损伤中的诱导

4.2 线粒体自噬相关蛋白BNIP3和NIX在脊髓损伤中的表达

4.3 自噬和线粒体自噬在脊髓损伤中的作用

全文结论

参考文献

文献综述线粒体自噬机制的研究进展

参考文献

攻读硕士研究生期间的研究成果

致谢