C57BL/6.NOD-Aec1Aec2干燥综合征模型小鼠干眼的眼表体征性别差异及免疫发病机制研究

摘要

干燥综合征(Sj(o)gren's syndrome，SS)是常见的、主要累及泪腺和涎腺的全身自身免疫性疾病，主要表现为口干、眼干等症状，其中眼干属于水液缺乏性干眼。干燥综合征的发病机制复杂，目前尚不十分明确。研究认为可能与遗传因素、环境因素以及性激素水平改变诱导的免疫调节失衡和絮乱有关。干眼是眼科临床上最常见的眼表疾病之一。近年来干眼的发病率逐年上升，临床实践中发现女性干眼患者的发病率明显高于男性。由于干眼病因的多样性和发病机制的复杂性，使干眼的防治受到严峻挑战。干眼的发病机制成为当前研究的热点，而良好的干眼动物模型是研究成功的关键。
　　近来研究发现C57BL/6.NOD-Aec1Aec2为良好的干燥综合征模型小鼠。该小鼠是将NOD(Non-obese disease，非肥胖性疾病)小鼠与C57BL/6J小鼠通过相互杂交，再近交多代后得到的只含有NOD小鼠中可参与干燥综合征发病的Idd3和Idd5两个疾病易感基因位点的小鼠，该模型小鼠完全显现出NOD小鼠类似干燥综合征的表型，还表现出唾液分泌减少、涎腺淋巴细胞浸润及IL-17、IL-23等炎性细胞因子表达增加。由此，该小鼠被认为是研究人原发性干燥综合征较为理想的动物模型。我们前期的实验研究表明，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠能自发地发生干眼以及泪腺组织中IL-17表达增加。
　　鉴于人类的干眼存在性别差异，C57BL/6.NOD-Aec1Aec2干燥综合征模型小鼠干眼体征的严重程度、眼表组织和泪腺结构等改变是否存在性别差异？IL-17在该小鼠模型中对干眼发病有无影响？目前尚未见系统报道。因此，我们提出研究假设:该干眼小鼠模型的干眼体征的严重程度可能存在性别差异，阻断IL-17可能会减轻该小鼠的干眼体征。为了验证这一假设，我们拟从以下两个方面进行实验:
　　1、C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠眼表体征的性别差异研究
　　为探讨C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠干眼体征的严重程度及泪腺的炎症反应是否存在性别差异，我们对雌性和雄性该模型小鼠在生后第4、8、12、16、20周龄时，分别进行了泪液分泌试验Ⅰ(Schirmer TestⅠ)、角膜荧光素染色、泪腺组织苏木素-伊红(hematoxylin-eosin，H&E)染色及角膜上皮扫描电境(Scanning electron microscopy, SEM)观察。结果发现:该模型小鼠雌性和雄性小鼠的干眼体征随着周龄的增加而进行性加重，第16周龄时，雌性小鼠较同龄雄性小鼠的泪液分泌值明显减少(P=0.038)，角膜荧光素染色评分增高（P=0.035），雌性小鼠泪腺组织结构破坏和间质中淋巴细胞浸润的程度更严重（P=0.019）。
　　2、C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠干眼免疫发病机制的初步研究
　　选取16周龄C57B L/6.NOD-Aec1Aec2雌性和雄性小鼠各5只，给予IL-17中和抗体小鼠腹腔内注射，观察阻断IL-17后小鼠的泪液分泌量、角膜荧光素染色及评分、泪腺组织病理学变化;采用Western blot对小鼠泪腺组织中的IL-17相对表达量进行分析。结果发现:阻断IL-17后可以明显减轻C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠的干眼体征，包括:泪液分泌量增加(P=0.000)，角膜荧光素染色评分减少（P=0.000），泪腺组织中淋巴细胞浸润明显减少(P=0.000);以及阻断IL-17后小鼠泪腺组织内IL-17的相对表达量明显减少(P=0.000)。
　　全文总结:1.成年C57BL/6.NOD-Aec1Aec2雌性小鼠的干眼体征较雄性小鼠更为严重，推测可能与小鼠体内性激素水平有关。2.阻断C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠IL-17后，小鼠干眼体征减轻，泪腺组织中淋巴细胞浸润明显减少。IL-17可能促进C57B L/6.NOD-Aec1Aec2小鼠干眼泪腺炎症的发生发展，在干眼的发病中发挥作用。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一章 前言

第二章 C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠眼表体征的性别差异研究

2．1 引言

2．2 材料与方法

2．3 结果

2．4 讨论

2．5 小结

第三章 C57BL/6.NOD-Aec1Aec2小鼠干眼免疫发病机制的初步研究

3．1 引言

3．2 材料与方法

3．3 结果

3．4 讨论

3．5 小结

全文总结

参考文献

文献综述

在读硕士期间发表论文

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