孕激素、基质金属蛋白酶10、瘦素受体与妊娠期糖尿病的相关性研究

摘要

背景:
　　妊娠期糖尿病(Gestational diabetes mellitus，GDM)提出，已有半个世纪的历史。研究发现胰岛素抵抗、脂肪因子、炎性因子、遗传因素以及自身免疫因素等都与GDM发病密切相关。脂肪因子之一的瘦素(Leptin，LEP)，自发现以来，国内外众多学者研究结果证实是参与糖脂代谢关键因子。瘦素生物学功能的实现，一是与体内瘦素浓度有关，二是与体内瘦素受体含量及分布有关。
　　脂肪组织是瘦素合成和分泌的主要场所。在对妊娠期代谢性疾病的研究发现，除脂肪组织外，胎盘组织是另一个可合成和分泌瘦素的重要组织。研究还发现胎盘组织除了合成瘦素外，还可表达瘦素受体。胎盘瘦素功能异常可导致GDM发生。瘦素受体分型众多(a，b，c，d，e，f)，存在形式多样(长型跨膜瘦素受体、短型跨膜瘦素受体和可溶性瘦素受体），目前瘦素受体的研究主要集中在长型跨膜瘦素受体(b型，long formof leptin receptor,Ob-R)和可溶性瘦素受体(e型，soluble form of leptin receptor,SLR)上。长型跨膜瘦素受体主要集中于中枢神经系统，胎盘组织也可表达Ob-R。SLR主要存在血清中，参与调控血清瘦素浓度。国外学者研究证实SLR在2型糖尿病人群的表达量低于正常人群。本课题组前期研究发现SLR在GDM组表达低于正常妊娠组。
　　胎盘组织可分泌多种激素参与糖代谢的调节，研究证实妊娠期糖耐量异常的孕妇血孕激素水平显著高于正常妊娠的孕妇，本课题组前期研究发现糖耐量异常的孕妇血瘦素水平与孕酮呈正相关，孕激素为GDM发病的高危因子。国内外学者分别证实孕激素可影响瘦素的生物学功能，有学者提出基质金属蛋白酶10(A Disintegrin AndMetalloprotease domain10，ADAM10)可通过裂解长型跨膜瘦素受体(Ob-R)产生可溶性瘦素受体(SLR)。又有学者研究发现基质金属蛋白酶的激活在一定程度上受到孕激素的影响。因此，我们推测孕激素可影响ADAM10，而ADAM10可通过裂解Ob-R，影响SLR的合成，干扰瘦素功能发挥，导致孕期糖代谢异常，参与GDM发病。
　　目的:
　　一、了解ADAM10在胎盘组织的表达情况;二、检测不同浓度孕激素对早孕人绒毛滋养层细胞表达ADMA10、Ob-R、SLR和LEP的影响，探索孕激素、ADMA10、SLR在GDM发病中的作用机制。
　　方法:
　　1、收集15例足月单胎GDM孕妇胎盘组织作为研究组，15例足月单胎正常妊娠孕妇胎盘组织作为对照组。所有纳入研究对象均参照国际糖尿病协会和妊娠研究组(International association of diabetes and pregnancy study groups，IADPSG)诊断标准，于妊娠24-28周行75g口服葡萄糖耐量实验(Oral Glucose Tolerance Test，OGTT)，满足该诊断标准的为GDM组，不满足为正常妊娠组。分别采用Western Blotting法、qRT-PCR法检测ADAM10蛋白及其mRNA在2组胎盘组织相对表达量，比较2组胎盘ADAM10的表达是否存在差异性。
　　2、收集我院妇产科门诊，正常妊娠6-10周，经超声证实为宫内妊娠，自愿选择人工流产终止妊娠且健康女性的早孕胚胎人绒毛组织，进行早孕人绒毛滋养层细胞的分离、培养及鉴定。根据本实验课题组关于孕激素与妊娠期糖代谢的相关性研究，分组给予不同浓度孕激素(0ng/ml、100ng/ml、150ng/ml、200ng/ml)培养早孕人绒毛滋养层细胞，收集细胞及上清液，行Westem Blotting实验检测人绒毛滋养层细胞ADAM10和Ob-R蛋白的表达，行酶免疫吸附法(Enzyme-linked Immunosorbent Assay,ELISA)检测上清液中SLR、LEP的含量。比较不同浓度孕激素对早孕人绒毛滋养层细胞ADAM10、Ob-R表达的影响及分泌SLR、LEP含量的影响，进一步推测ADAM10与GDM发病是否存在相关性。
　　结果:
　　第一部分:Western Blotting检测证实ADAM10蛋白在GDM组的含量显著低于正常妊娠组(0.98±0.26 VS1.59±0.51，P＜0.01)，qRT-PCR实验结果显示ADAM10mRNA在GDM组的表达低于正常妊娠组(0.37±0.25 VS1.00±0.00，P＜0.01)。
　　第二部分:(1)在0ng/ml、100ng/ml、150ng/ml和200ng/ml孕激素浓度下人绒毛滋养层细胞ADAM10相对表达量分别为1.9411±0.4301、1.3700±0.3041、0.7743±0.1844、0.2433±0.6122，组间两两比较P＜0.05具有统计学意义。(2)各组细胞表达Ob-R相对表达量分别为0.5796±0.3197、0.7070±0.3155、1.2446±0.6636和1.5168±0.8224，组间比较，无统计学意义(P＞0.05)。(3)各组上清液中SLR浓度分别为:9.4990±0.8068、7.3213±0.1496、5.8720±0.0180和3.8758±1.0690为(ng/ml)，组间两两比较P＜0.05具有统计学意义。(4)各组上清液中LEP浓度为144.87±10.975、287.09±28.762、332.42±14.867、443.09±12.389(ng/ml)，组间两两比较P＜0.05具有统计学意义。
　　结论:
　　1.胎盘组织表达ADAM10，且GDM组胎盘组织ADAM10蛋白及其mRNA的含量低于正常妊娠组，ADAM10可能参与GDM的病理过程。
　　2.孕激素作用于早孕人绒毛滋养层细胞，随着浓度增加ADAM10、SLR的表达量降低。提示:孕激影响ADAM10表达使SLR分泌量减少，瘦素生物学功能降低，糖脂代谢异常，参与GDM发生的病理过程。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一章 前言

第二章 基质金属蛋白酶10在GDM胎盘组织中的表达

2．1 材料和方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 不同浓度孕激素影响早孕人绒毛滋养层细胞表达ADAM10、Ob-R和分泌SLR

3．1 实验材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

3．4 小结

全文结论

参考文献

文献综述

附件

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢