新型血小板源生长因子对放创复合伤大鼠创面的促愈作用

摘要

研究背景:放射损伤合并创伤称为“放创复合伤”，战时多见于核爆炸，平时见于核事故、核恐怖活动及放化疗后，其特点表现为伤口经久不愈。前期研究发现其难愈的机制与放射损伤导致局部修复细胞数量减少和功能障碍以及抑制基质细胞产生生长因子等相关，如何促进难愈性伤口的愈合始终是研究的重点。血小板源生长因子（platelet-derived growth factor，PDGF）是由多种细胞产生的，能刺激间质来源的细胞增殖的多肽，具有广泛的生理活性，在创伤愈合的各个阶段都发挥作用，对创伤的修复有明显的促进作用。美国已上市用于治疗糖尿病足部溃疡的Regrenex(0.01％rh-PDGF-BB)，每支售价高达400多美元，限制其临床的应用。为满足战伤愈合军队特需药品研发的需要，中国人民解放军军事医学科学院微生物流行病研究所在前期研究的基础上，从Pichia酵母中表达纯化，研制了新型血小板源生长因子(RecombinantHuman Platelet-derived Growth Factor-BB，rhThr6-PDGF-BB)，在重大新药创制的资助下（课题编号:2011ZXJ09104-03B），本项目承担新的重组人血小板源生长因子对放创复合伤难愈性的药效评价。应用放创复合伤的实验动物模型，观察rhThr6-PDGF-BB对放创复合伤创面愈合的影响，为开发具有自主知识产权的难愈性创伤新药物提供理论依据。
　　方法:选用Wistar大鼠120只，60Co-γ射线全身照射，照射剂量为4Gy同时合并直径2cm皮肤全层切口，制作大鼠皮肤放创复合伤模型。随机分为空白对照组，凝胶基质对照组，低剂量药物组，中剂量药物组，高剂量药物组，阳性药物对照组共6组，每组20只大鼠，在洁净动物间饲养，每日将相应的药物涂于创面，观察伤后各组创面愈合情况，计算创面愈合百分比、形态学观察创面上皮细胞迁移、肉芽组织生长状况和新生血管密度情况，免疫组化检测Bcl-2蛋白、PDGF-A和VEGF蛋白的表达情况。
　　结果:伤后14d，中、高剂量药物组大鼠创面基本愈合，创面愈合速度明显加快，而对照组愈合速度较慢，14d时创面未完全愈合，中、高剂量药物组与空白对照组愈合速度有显著性差异(P＜0.05)。rhThr6-PDGF-BB药物组上皮移行速率快，肉芽组织出现较早，成纤维细胞和新生毛细血管均较对照组丰富，高剂量药物组较为明显。在新生肉芽组织中PDGF-A、VEGF和Bcl-2表达增加，rhThr6-PDGF-BB促进创面愈合的机制可能是:一方面rhThr6-PDGF-BB可以直接促进局部修复细胞趋化和迁移到创面，加速修复细胞分裂增殖，参与创面修复;另一方面，rhThr6-PDGF-BB还可以刺激局部残存和新生的炎症细胞和修复细胞表达VEGF和PDGF-A，趋化修复细胞参与创面修复;再次，rhThr6-PDGF-BB还具有抑制细胞凋亡的功能，增加局部修复细胞的数量，促进创面愈合。
　　结论:自主研发的创新药物rhThr6-PDGF-BB对放射复合伤创面有明显的促愈效果，为rhThr6-PDGF-BB的进一步开发研究提供了理论依据。

目录

声明

缩略语表

摘要

前言

第一部分 rhThr6-PDGF-BB对放创复合伤大鼠皮肤创面促愈作用观察

1．1 材料和方法

1．2 结果

1．3 讨论

1．4 小结

第二部分 rhThr6-PDGF-BB对放创复合伤大鼠皮肤创面促愈机制的探讨

2．1 材料和方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．5 小结

全文总结

参考文献

综述

攻读学位期间的研究成果

致谢