α-ENaC mRNA表达水平及其编码基因SCNN1A多态性与新生儿RDS相关性的研究

摘要

目的：
　　国内外多家新生儿重症监护病房(neonatal intensive care unit，NICU)报道足月儿与近足月儿呼吸窘迫综合征（respiratory distress syndrome，RDS）患病率明显上升，且具备不同于早产儿RDS的临床特征，足月儿与近足月儿RDS的病因、发病机制、预防和治疗方法受到越来越多新生儿科医师的重视。本课题拟对不同胎龄RDS患儿进行肺表面活性物质疗效比较，以期观察是否外源性肺表面活性物质替代治疗对所有RDS患儿都有效，对前期提出的近足月/足月儿RDS病因可能不同于早产儿的设想进行临床验证。并利用HapMap数据库和单体型相结合的方法，对SCNN1A基因所有SNP位点进行分析，并从中挑选出与新生儿尤其是近足月/足月儿RDS发病密切相关的标志性SNP位点。同时通过检测不同胎龄正常新生儿和RDS患儿鼻腔上皮α-ENaC mRNA相对表达量，进一步验证携带易感基因型的新生儿与α-ENaC mRNA表达及RDS发病之间的关系。
　　方法：
　　1.不同胎龄呼吸窘迫综合征（RDS）新生儿肺表面活性物质替代治疗疗效比较
　　1.研究对象
　　收集2010年1月至2013年2月在第三军医大学大坪医院儿科NICU住院治疗的168名RDS患儿，均接受外源性肺表面活性物质替代治疗。经过进一步筛选，最终入选135名RDS患儿，所有研究对象均为中国籍汉族。根据胎龄将其分为3组:组1(早产儿组）:胎龄＜35周(n=54);组2（近足月儿组）:35周≤胎龄＜37周(n=35);组3（足月儿组）:胎龄＞37周(n=46)。
　　2.SCNN1A基因多态性与新生儿RDS的关联性研究
　　3.α-ENaC mRNA表达水平分析及其与RDS相关性的初步研究
　　结果:
　　1.不同胎龄RDS新生儿肺表面活性物质替代治疗疗效比较
　　1.1用肺表面活性物质前后血气结果比较:
　　用肺表面活性物质前三组患儿间PH值、PaO2、 PaCO2差异均无统计学意义(P＞0.05);给予肺表面活性物质气管内滴入治疗后六小时，胎龄＜35周早产儿组血气指标明显改善:PH值、PaO2较治疗前显著上升，PaCO2较用药后显著下降，差异有统计学意义(P＜0.05);35周≤胎龄＜37周的近足月儿组3项血气指标均无明显改善(P＞0.05);而胎龄＞37周的足月儿组在用药后6小时血气指标不仅无明显改善，反而较用药前更糟糕:PH值无显著变化(P＞0.05)，PaO2显著降低、PaCO2显著升高(P＜0.05)。
　　1.2用肺表面活性物质前后氧合参数比较:
　　用肺表面活性物质前三组患儿间FiO2、 OI、PaO2/PAO2差异均无统计学意义(P＞0.05);用肺表面活性物质治疗6小时后，胎龄＜35周早产儿组氧合参数较用药前明显改善:FiO2显著降低(P＜0.05)，PaO2/PAO2显著升高(P＜0.05)，OI值无显著变化(P＞0.05);而胎龄＞35周的近足月和足月儿组在用药后氧合参数不仅无明显改善，甚至较用药前更糟糕:FiO2和OI值均显著升高(P＜0.05)，PaO2/PAO2无显著变化(P＞0.05)。
　　1.3治疗结局:
　　三组患儿气管插管率、机械通气时间以及存活率比较差异无统计学意义(P＞0.05);而住院时间和肺表面活性物质重复使用率差异有统计学意义(P＜0.05)。随着胎龄的增加，住院时间逐渐缩短，而肺表面活性物质重复使用率明显增加。
　　2.SCNN1A基因多态性与新生儿RDS的关联性研究
　　在总样本中，X2检验和logistic回归分析结果均提示仅位点rs4149570多态性与新生儿RDS发病密切相关(P＜0.05)，其中AA基因型是RDS发病的高危因素。亚组分析结果提示，在胎龄大于37周的亚组中，除了SNP位点rs4149570，位点rs7956915多态性也与RDS发病相关(P＜0.05)，两个位点均提示仅突变基因型(AA)是新生儿RDS发病的高危因素;有趣的是，在胎龄小于37周的两个早产儿亚组中，未发现与新生儿RDS发病相关的SNP位点(P＞0.05)。此外，在总样本中，根据RDS严重程度将RDS患儿分为4组，之前得到的两个阳性SNP位点(rs4149570和rs7956915)均与RDS严重程度相关性无统计学意义(P＞0.05)。
　　结论:
　　1.外源性肺表面活性物质替代治疗对于胎龄小于35周的早产儿RDS疗效更佳，而近足月/足月儿并未取得同等疗效;近足月/足月儿可能存在不同于早产儿RDS的病因和发病机制。
　　2.SCNN1A基因rs4149570和rs7956915位点多态性可能是中国汉族新生儿尤其是足月儿RDS发病的重要易感因素，但与RDS严重程度无相关性。
　　3.正常新生儿鼻腔上皮α-ENaC mRNA表达量受胎龄的调控，随着胎龄的增加，其表达量逐渐增加;而RDS患儿α-ENaC mRNA表达量与胎龄不相关，且显著低于正常新生儿α-ENaC mRNA表达量。新生儿鼻腔上皮α-ENaC mRNA的相对表达量（内参基因POLR2A）低于0.82可作为临床预测RDS发病风险性的参考指标，对明确呼吸窘迫症状患儿病因及指导其治疗方案的制定具有重要意义。
　　4.SCNN1A基因rs4149570位点多态性与α-ENaC mRNA表达量呈显著线性相关，携带突变基因型(AA)的患儿可能在整个围产期通过抑制α-ENaC mRNA的表达量而影响肺液的清除或肺表面活性物质的活性，最终导致RDS的发生。

目录

声明

缩略语表

摘要

第一章 前言

第二章 不同胎龄RDS新生儿肺表面活性物质替代治疗疗效比较

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

第三章 SCNN1A基因多态性与新生儿RDS的关联性研究

3．1 材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

第四章 α-ENaC mRNA表达水平分析及其与RDS相关性的初步研究

4．1 材料与方法

4．2 结果

4．3 讨论

全文总结

参考文献

文献综述一 肺液吸收障碍致在近足月／足月儿呼吸窘迫综合征发病机制中的作用研究进展

文献综述二 遗传因素在呼吸窘迫综合征中的作用研究进展

附录

博士期间撰写及发表的论文

致谢