藤茶中二氢杨梅素的提取及其金属配合物制备、生物活性研究

摘要

藤茶，学名显齿蛇葡萄（Ampelopsis grossedentata），广泛分布于我国南方。由于其广泛的生物学活性而备受关注，在其茎叶中含有的主要黄酮是二氢杨梅素（Dihydromyricetin，DMY）。DMY具有清除氧自由基、消炎、抑菌、降脂、抗肿瘤等生理活性，其化学结构具有很高的超离域度和大π键共轭体系，能与金属离子形成稳定的配合物。本文探讨了藤茶中DMY的提取及优化工艺，设计合成了钒、锌和铬等系列二氢杨梅素金属配合物。此外，初步测试了这些金属配合物与DNA的相互作用、抗氧化性和抗肿瘤作用。主要的研究内容如下：
　　1.对提取溶剂进行初筛后，再通过正交设计实验优化了DMY的提取工艺。实验显示，乙酸乙酯为所选中的最佳提取溶剂。当提取时间50min、提取温度50℃、料液比1:20时，DMY的提取率可达14.28％左右。方差分析结果显示，影响DMY提取率的几种因素的大小顺序为：料液比>提取温度>提取时间。
　　2.为了考察相关二氢杨梅素金属配合物的生物活性，合成了Zn-DMY、Cr-DMY和VO-DMY，以元素分析、IR、ESI-MS和1H NMR对化合物进行了结构表征。采用紫外-可见滴定法、荧光分光光度法、流体力学分析法以及琼脂糖凝胶电泳法测试了上述化合物与DNA的相互作用。实验显示，这些化合物均能以插入方式与小牛胸腺DNA结合。荧光滴定实验显示DMY、VO-DMY、Cr-DMY以及Zn-DMY都可以与EB竞争性抢夺DNA的结合位点，相应的Ksv值分别为：4.03、0.32、0.55和1.08×104 L/mol。而流体力学分析法显示，随着配合物与DNA的浓度比例增大，粘度呈明显上升的趋势。其中，VO-DMY上升的幅度最大，其次是Zn-DMY和Cr-DMY，且均强于DMY配体。另外，这些化合物在双氧水存在的条件下，对质粒DNA具有良好的断裂作用。
　　3.运用MTT法并以顺铂作为阳性对照，观察了这些配合物对肝癌细胞HepG2增殖的抑制能力。实验结果表明，VO-DMY对HepG2细胞抑制能力最强，其IC50值为23.8±1.9μmol/L。为了解VO-DMY对HepG2细胞的作用机制，运用流式细胞术对细胞的凋亡率以及凋亡周期进行了检测。结果表明，VO-DMY可以诱导细胞凋亡，且具有浓度依赖性；细胞的周期检测还显示，HepG2细胞的周期主要被阻滞在G2/M期。但是，VO-DMY诱导HepG2细胞凋亡机制，仍有待于进一步的研究。此外，运用了Fenton反应对相关配合物的羟基自由基清除能力进行了检测。实验还表明，DMY、Cr-DMY、Zn-DMY和VO-DMY都具有一定的清除该自由基的活性，其中，VO-DMY的清除作用最佳，而DMY、Cr-DMY和Zn-DMY清除效果相近，相关机理有待于进一步研究。

目录

声明

第一章 绪论

1.1 民间藤茶药用概况

1.2 藤茶化学成分研究进展

1.3 药理作用研究进展

1.4 二氢杨梅素-金属配合物的研究

1.5 选题意义

第二章 藤茶中二氢杨梅素的提取及工艺优化

2.1 仪器试剂

2.2 实验方法

2.3 结果与讨论

2.4 本章小结

第三章 二氢杨梅素金属配合物的合成及其与DNA的相互作用

3.1 实验部分

3.2 结果与讨论

3.3 本章小结

第四章 二氢杨梅素配合物抗肝癌活性的研究

4.1 实验仪器与试剂

4.2 实验方法与步骤

4.3 结果与讨论

4.4 本章小结

参考文献

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢

附录 化合物的部分表征图谱