IL-33在TNBS诱导炎症性肠病中的免疫调节作用研究

摘要

炎症性肠病(Inflammatory bowel disease，IBD)是一类慢性非特异性肠道炎症疾病，包括溃疡性结肠炎（Ulcerative Colitis，UC）和克罗恩病（Crohn’s Disease，CD），其临床症状主要表现为腹泻、腹痛和肠梗阻，并有恶变倾向，增加了大肠癌的发病风险。机体Th1/Th2型免疫失衡是炎症性肠病发病的重要免疫学因素，而维持肠黏膜免疫平衡成为IBD防治的新方法。本课题采用三硝基苯磺酸(trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS)诱导Th1型免疫主导的小鼠炎症性肠病为模型，探讨白介素（IL）-33在炎症性肠病中的作用及潜在机制，为临床治疗炎症性肠病提供新的方法与思路。
　　目的：
　　1.明确IL-33在TNBS诱导Th1型细胞介导的炎症性肠病中的作用，探讨相关的免疫学机制；
　　2.过继IL-33诱导的替代活化巨噬细胞（AAM），检测其在炎症性肠病中的作用及相关机制，为炎症性肠病防治提供新的理论知识和实验依据。
　　方法：建立TNBS诱导的炎症性肠病模型，观察IL-33在炎症性肠病中的作用。依据组织病理学检查判断IL-33治疗效果，免疫荧光技术检测结肠损伤部位巨噬细胞表型的表达情况，实时定量PCR技术检测结肠损伤部位细胞因子以及巨噬细胞相关基因的表达水平。替代活化巨噬细胞过继至炎症性肠病小鼠，通过组织病理学检查、免疫荧光检测及RT-PCR等实验技术，观察替代活化巨噬细胞对炎症性肠病的治疗效果，同时过继绿色荧光蛋白（GFP）标记的F4/80＋巨噬细胞，检测巨噬细胞在炎症性肠病小鼠结肠组织中的分布情况。
　　结果：
　　1.IL-33缓解TNBS诱导的炎症性肠病结肠病理损伤
　　建立小鼠IBD模型，腹腔给予IL-33治疗后，临床病理表现如腹痛、腹泻、食欲不振等症状有明显的改善，炎症情况明显好转，组织病理损伤减轻；PCR结果显示小鼠结肠损伤部位促炎性细胞因子TNF-α表达降低；组织免疫荧光以及PCR结果显示结肠组织中M2型巨噬细胞特异标记基因Arg1、YM1表达升高。
　　2.IL-33对巨噬细胞极化的影响
　　在正常小鼠体内，IL-33腹腔注射可诱导巨噬细胞向M2型极化，并上调M2型相关分子表达；同时IL-33诱导体外腹腔巨噬细胞向M2型极化。
　　3.替代活化巨噬细胞过继治疗缓解炎症性肠病病理损伤
　　IL-33诱导的替代活化巨噬细胞过继治疗能明显抑制TNBS诱导的炎症性肠病进展，减轻结肠组织病理损伤程度，降低结肠损伤部位TNF-α表达，同时GFP标记的F4/80＋巨噬细胞主要分布于结肠粘膜下层及固有层部位。
　　结论：IL-33处理能明显缓解TNBS诱导的IBD病情进展，其免疫学机制可能与诱导替代活化巨噬细胞生成相关。

目录

声明

第一章 序言

第二章IL-33缓解TNBS诱导的炎症性肠病

2.1 前言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5 讨论

第三章 IL-33诱导替代活化巨噬细胞（AAM）的生成及其功能

3.1 前言

3.2 实验材料

3.3 实验方法

3.4 实验结果

3.5 讨论

第四章 IL-33诱导的替代活化巨噬细胞的在治疗中的作用

4.1 前言

4.2 实验材料

4.3 实验方法

4.4 实验结果

4.5 讨论

全文总结

参考文献

附录1英文缩写语中文对照

附录2攻读学位期间发表的论文

致谢