重组抵抗素对原代猪前脂肪细胞增殖与分化的影响

摘要

动物脂肪沉积是脂肪细胞数量增加、体积增大以及脂滴聚集的结果。近年来的研究表明，脂肪组织不仅是机体能量储存的场所，同时也能分泌诸如抵抗素(resisitin)、瘦素(leptin)、肿瘤坏死因子a(TNF-a)，白细胞介素6(IL-6)等多种脂肪细胞因子(adipocytokines)调节机体能量代谢调节。本研究旨在探讨抵抗素对猪前脂肪细胞代谢、增殖与分化的影响及其与胰岛素、胰高血糖素的相互关系。 1、取1～7日龄新生仔猪颈部皮下脂肪组织，利用胶原酶消化法获取猪前脂肪细胞，于37℃、5％CO2、饱和湿度下进行原代培养，通过MTT法，油红O染色以及测定细胞内脂蛋白脂酶活性鉴定猪前脂肪细胞。结果显示，猪前脂肪细胞数量呈指数增长，于分化第3天细胞内开始充脂，此后充脂程度逐渐加剧，细胞形态由原始的成纤维细胞样演变为圆形的细胞形态，同时，细胞内脂蛋白脂酶的活性呈现出先上升后下降的变化趋势。由此可见，采用胶原酶法获得的细胞符合前脂肪细胞的特征。 2、为了探讨重组抵抗素水平对前脂肪细胞增殖与分化的影响，将原代培养猪前脂肪细胞随即分为5组，分别在含10％小牛血清的DMEM/F12培养基中加入0、50，100，150，200ng/mL的重组抵抗素。通过形态学观察以及测定细胞内甘油三酯含量和脂蛋白脂酶活性等方法评定前脂肪细胞的增殖与分化情况。结果表明，100ng/mL抵抗素能显著促进猪前脂肪细胞的增殖，随着重组抵抗素的剂量增加，这种促增殖作用有减弱的趋势。重组抵抗素同样能促进前脂肪细胞分化，但这种促分化作用随着重组抵抗素的剂量的增加而增强，细胞的充脂程度越强。 3、采用六因素三水平正交试验设计(有交互作用)，通过MTT法，油红O染色，测定细胞内甘油三酯含量以及脂蛋白脂酶活性来评估重组抵抗素，胰岛素以及胰高血糖素的交互作用对猪前脂肪细胞增殖与分化的影响。结果表明，100ng/mL重组抵抗素与150nmol/L胰岛素相互作用对前脂肪细胞的增殖具有显著性作用，并且显著提高细胞内脂蛋白脂酶的活性，并且这种促进作用均强于两者各自单独作用时所产生的影响；而100ng/mL重组抵抗素与300nmol/L的胰岛素相互作用则能显著促进前脂肪细胞的分化，刺激细胞内甘油三酯的合成代谢。本研究未观察到胰高血糖素对猪前脂肪细胞增殖和分化的作用，但胰高血糖素能促进甘油三酯的分解代谢，抑制脂蛋白脂酶活性。 本研究结果表明，抵抗素在调节猪前脂肪细胞代谢、增殖与分化中发挥了重要作用，前脂肪细胞增殖的数量、分化的时机可能与胰岛素和抵抗素的相互作用有关。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩写词表

声明

1 前 言

1.1 研究目的与意义

1.1.1研究脂肪细胞增殖与分化的意义

1.1.2研究抵抗素对前脂肪细胞增殖与分化影响的意义

1.2 国内外的研究进展

1.2.1前脂肪细胞的增殖与分化

1.2.2前脂肪细胞增殖与分化的鉴定

1.2.3影响前脂肪细胞离体培养的因素

1.2.4前脂肪细胞增殖与分化的影响因素

1.2.5抵抗素与脂肪细胞

1.3 研究内容和方法

1.3.1主要研究内容

1.3.2主要研究方法

1.3.3需要解决的问题

2猪前脂肪细胞的分离及鉴定

2.1 试验材料

2.1.1动物

2.1.2仪器与试剂

2.2主要试剂的配制

2.3试验方法

2.3.1猪前脂肪细胞的原代培养

2.3.2猪前脂肪细胞的鉴定

2.4 结果

2.4.1关于细胞的生长曲线

2.4.2细胞形态变化观察

2.4.3猪前脂肪细胞分化中脂蛋白脂酶(LPL)活性

2.5讨论与分析

2.5.1关于无菌操作

2.5.2猪前脂肪细胞的增殖规律

2.5.3猪前脂肪细胞的形态观察

2.5.4猪前脂肪细胞标志酶--脂蛋白脂酶活性的变化

2.6小结

3重组抵抗素对猪原代前脂肪细胞增殖与分化的影响

3.1试验材料

3.1.1试验动物

3.1.2供试材料

3.1.3仪器与试剂

3.2主要试剂配制

3.3试验方法

3.3.1猪前脂肪细胞的原代培养

3.3.2试验设计

3.4结果

3.4.1 MTT法测细胞增殖率

3.4.2培养细胞的形态学观察及充脂率测定

3.4.3培养细胞内甘油三脂(TG)含量

3.4.4培养细胞内脂蛋白脂酶活性的变化

3.5讨论与分析

3.5.1重组抵抗素对原代培养猪前脂肪细胞增殖的影响

3.5.2重组抵抗素对原代培养猪前脂肪细胞分化影响

3.5.3重组抵抗素对原代培养猪前脂肪细胞内甘油三酯代谢的影响

3.5.4重组抵抗素对猪前脂肪细胞内脂蛋白脂酶活性的影响

3.6 小结

4重组抵抗素，胰岛素及胰高血糖素对猪原代前脂肪细胞增殖与分化的影响

4.1试验材料

4.1.1试验动物

4.1.2试验材料

4.1.3仪器与试剂

4.1.4主要试剂的配制

4.2试验方法

4.2.1猪前脂肪细胞的获取及原代培养

4.2.2试验设计

4.2.3检测指标

4.3结果

4.3.1抵抗素、胰岛素及胰高血糖素对猪前脂肪细胞增殖的影响

4.3.2抵抗素、胰岛素及胰高血糖素对猪前脂肪细胞分化的影响

4.3.3细胞内甘油三酯含量的测定

4.3.4脂蛋白脂酶的活性测定

4.4讨论

4.4.1不同因素及处理水平对猪前脂肪细胞增殖的影响

4.4.2不同因素及处理水平对猪前脂肪细胞分化的影响

4.4.3不同因素及处理水平对猪前脂肪细胞甘油三酯代谢的影响

4.4.4不同因素及处理水平对猪前脂肪细胞脂蛋白脂酶活性的影响

4.5小结

5结论及创新点

5.1主要结论

5.2本研究的创新点

参考文献

致 谢

作者简介及导 师简介