抗CD137L单克隆抗体对系统性红斑狼疮鼠免疫干预的研究

摘要

目的：通过研究Pristane诱导的系统性红斑狼疮(SLE)模型鼠淋巴细胞表面共刺激信号的变化，进而探讨体内阻断CD137/CD137L共刺激信号对SLE模型鼠疾病变化的影响。
　　方法：1.建立狼疮鼠模型，雌性6-8周龄BALB/c鼠单次腹腔注射Pristane0.5ml，对照组BALB/c鼠注射PBS0.5ml。2.四溴酚蓝指示剂法检测BALB/c鼠尿蛋白含量、ELISA法检测BALB/c鼠外周血自身抗体（抗ds-DNA、抗Sm/RNP）含量、HE染色评估BALB/c鼠病理学损伤，对狼疮鼠模型进行鉴定。3.分离对照组和模型组小鼠外周血和脾脏淋巴细胞，采用流式细胞术（FCM）双标记法检测T细胞表面CD28、CD40L、CD137和B细胞表面CD40、CD137L分子的表达变化。4.免疫组化检测对照组和模型组小鼠肺组织共刺激分子CD28、CD40L、CD137的表达。5.半定量RT-PCR检测小鼠脾脏组织中细胞因子TNF-α、IFN-γmRNA水平。6.运用抗CD137L单克隆抗体进行体内免疫干预：Pristane注射三个月后，小鼠随机分为四组，分别尾静脉注射抗CD137L单克隆抗体0、10、50、100ug，PBS注射组小鼠注射适量生理盐水。每周1次，共计3次。7.不同剂量干预组小鼠与对照组小鼠生物学鉴定及病理学检查：尿蛋白试纸法检测尿蛋白含量、ELISA法检测外周血自身抗体（抗ds-DNA、抗Sm/RNP）含量、HE染色评估病理学损伤。8.荧光定量PCR检测不同剂量干预组小鼠与对照组小鼠脾脏组织中细胞因子TNF-α、IFN-γmRNA水平。
　　结果：1. Pristane成功诱导SLE小鼠模型：?模型组小鼠1个月时开始出现蛋白尿，且随月份增加蛋白尿阳性率逐渐升高；对照组小鼠尿蛋白基本为阴性。?模型组小鼠血清抗Sm/RNP抗体和抗ds-DNA抗体分别于第三、四个月时明显高于对照组，并维持高水平状态至处死；对照组小鼠基本保持不变。?模型组小鼠出现关节肿胀和面部―红斑‖；对照组小鼠无异常改变。④HE染色，模型组小鼠肺、肝脏和肾脏出现不同程度的病理学改变。2.流式结果显示，模型组小鼠外周血T细胞表面共刺激分子CD28一个月时表达升高后逐渐下降至低于正常对照组（P<0.01）；T细胞表面CD40L的表达变化无统计学意义（P>0.05），B细胞表面共刺激分子CD40三个月时表达升高，六个月时表达下降至低于正常对照组（P<0.05）；共刺激分子CD137、CD137L三个月时表达增高并维持高表达状态至处死（P<0.05）。对照组小鼠外周血淋巴细胞表面共刺激分子表达变化无统计学意义（P>0.05）。小鼠脾脏淋巴细胞表面共刺激分子CD28、CD40L/CD40和CD137/CD137L的表达变化与外周血基本一致。3.免疫组化结果显示，共刺激分子CD28、CD40L和CD137在模型组小鼠肺组织细胞中表达阳性，但在对照组小鼠肺组织基本无表达。4.RT-PCR结果显示，与对照组相比模型组小鼠脾脏组织中细胞因子TNF-α、IFN-γ mRNA水平升高。5.抗CD137L单克隆抗体干预后，狼疮鼠的部分临床症状和体征得到改善，肝脏、肺和肾脏组织的病变程度较未干预组减轻。6.不同剂量干预组与未干预组小鼠相比，脾脏组织中细胞因子TNF-α、IFN-γ mRNA水平降低。
　　结论：1.狼疮鼠体内共刺激分子发生明显变化，细胞因子TNF-α、IFN-γ mRNA水平升高，可能与SLE疾病发生发展相关。2.抗CD137L单抗对狼疮鼠进行免疫干预，对狼疮鼠的病变有一定的改善作用，为临床治疗SLE提供了新思路。

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英文摘要

前言

材料和仪器

1 主要试剂和材料

2 主要仪器设备

3 实验动物

实验方法

1.实验动物分组及实验小鼠处理

2.小鼠SLE模型的鉴定

3.流式细胞术和免疫组织化学法检测小鼠体内共刺激分子的表达

4.RT-PCR和荧光定量PCR检测小鼠组织中TNF-α、IFN-γ的表达

5.统计学处理

实验结果

1.Pristane成功建立SLE小鼠模型

2.狼疮鼠外周血、脾脏淋巴细胞表面共刺激分子表达异常 PBS 或

3.模型鼠肺组织中CD28、CD40L、CD137阳性表达 CD28和CD40L蛋白定

4.模型组小鼠脾组织中 TNF-α 和 IFN-γ 基因表达水平上调 PBS 或

5.抗CD137L单克隆抗体体内免疫干预对狼疮鼠的影响

讨论

结论

参考文献

附录A 中英文词汇对照

附录B 个人简历及发表文章

附录C 综述: CD137信号途径与临床疾病研究新进展