金花茶茶花黄酮类化合物的分离纯化及抗氧化活性的初步研究

摘要

金花茶(Camellia chrysantha)是山茶科、山茶属、金花茶组、金花茶系植物。金花茶是茶花家族中唯一花瓣为金黄色的珍稀物种，也是世界性的名贵观赏植物。近年来随着金花茶人工种植的增加，金花茶的应用有待进一步开发。金花茶茶花含有丰富的营养成分，但理论研究却相当缺乏，同时也没得到很好的开发利用。研究表明金花茶茶花中含非常丰富的黄酮类化合物，同时大量研究也表明黄酮类化合物具有抗氧化、增强免疫调节、防癌、抗癌、抗衰老、抗疲劳、降血脂、抗菌抑菌、诱导肿瘤细胞凋亡等作用，而且抗氧化作用是其他功能作用的理论基础。为了对金花茶进行进一步的开发利用，本课题选择以金花茶茶花为原料提取其中丰富的黄酮类化合物，并对茶花黄酮类化合物做进一步的分离纯化及抗氧化活性研究。
　　本研究采用超声辅助提取法提取金花茶茶花中的黄酮类化合物，实验考察了料液比、乙醇浓度、提取温度、提取频率及提取次数对黄酮类化合物得率的影响。结果表明最适的提取条件为：温度70℃、乙醇浓度20％、料液比1:45(g/mL)、超声功率300W、提取1次。在此工艺条件下黄酮类化合物得率高达13.7％。
　　利用乙醇分级沉淀法对超声提取的黄酮类化合物进行初处理，乙醇分级沉淀后黄酮类化合物、茶多糖、粗蛋白含量分别减少了7.8％、65.3％和29.3％，结果表明乙醇分级沉淀法能有效达到初分离目的。实验选择大孔树脂做进一步的分离纯化，以吸附率和解析率为考察因素，通过静态吸附实验从D101、XAD1600、XAD16、AB-8、DM130、S-8中选择了合适的大孔树脂树XAD1600。XAD1600大孔树脂的静态吸附率和解析率分别为35.8％和79.1％。通过静态实验研究了样液pH值、浓度、洗脱液乙醇浓度对分离纯化的影响。在静态实验的基础上进行了动态研究，结果表明最适纯化条件为装柱大孔树脂径高比1:8、吸附过程中上样液pH=5.0、浓度1.6mg/mL、流速1.0mL/min，最适上样液体积为660mL，洗脱液乙醇浓度为60％，洗脱率高达93.7％。实验对超声提取液、乙醇沉淀后的黄酮类化合物及大孔树脂分离纯化后的产品进行了纯度考察，纯度分别为32.7％、40.7％和83.4％。茶花提取液经分离纯化后黄酮类化合物纯度提高2.55倍。因此通过乙醇沉淀和XAD1600大孔树脂处理能够很好的分离纯化茶花黄酮类化合物。
　　研究对吸附后的黄酮类化合物进行梯度洗脱，洗脱后得到黄酮类化合物含量较多的三个组分YKC1、YKC2、YKC3，用Vc为对照通过对OH·、O2-·和DPPH自由基的清除力来考察各组分的抗氧化活性。结果显示：在设定浓度范围内各组分对OH·清除效果较理想，清除率呈剂量关系；清除O2-·实验中浓度为0.25mg/mL时YKC2的清除率为57.8％；各组分对DPPH自由基的清除率随着浓度的增加而增大，YKC1和YKC2的清除效果较好，当浓度为0.25mg/mL时YKC2的清除率为77.35％。