斜带石斑鱼BOK基因的克隆及功能分析

摘要

斜带石斑鱼（Epinephelus coloides）隶属鲈形目、鮨科、石斑鱼亚科，石斑鱼属，属中下层暖水性鱼类，拥有生长速度快，养殖成活率高等优点，适宜在我国南方沿海地区养殖。基于以上养殖优势，使得斜带石斑鱼快速成为我国沿海地区及亚洲沿海国家经济养殖品种。然而养殖规模的不断扩大，海水养殖环境污染问题日益严峻，且细菌性及病毒性病害频繁爆发，给石斑鱼养殖产业造成了非常大的经济损失。从石斑鱼病变组织中分离出一株能够引起石斑鱼高死亡率的病毒，并命名为新加坡石斑鱼虹彩病毒(Singapore grouper iridovirus,SGIV)，可导致石斑鱼死亡率高达90%以上，但是对于SGIV病毒感染斜带石斑鱼的免疫应答机制的研究，特别是宿主与病毒间相互作用还缺乏了解。
　　1.本论文通过RACE-PCR技术成功克隆了斜带石斑鱼（Epinephelus coloides） BOK（EcBOK）基因的cDNA全长。EcBOK基因全长1433bp，5’非编码区（5’-UTR）为236bp，3’非编码区（3’-UTR）为574bp，开放阅读框（ORF）为633bp，可编码翻译210个氨基酸，其蛋白分子量大小（MW）为23.18 KDa，理论等电点（pI）为8.47。蛋白结构分析结果显示EcBOK含有1个跨膜结构域（TM），4个Bcl-2家族同源机构域（BH）。BLASTX氨基酸比对表明EcBOK与深裂眶锯雀鲷(Stegastes partitus,97%)，尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus,93%)，红鳍东方鲀(Takifugu rubripes,90%)和家鸡(Gallus gallus,69%)BOK基因的同源性较高。
　　2.斜带石斑鱼BOK基因在其所检测组织中都有分布，其相对表达量在心脏和鳃这两个组织中较高，SGIV感染GS细胞后，EcBOK基因表达量上调，这说明EcBOK基因可能参与了宿主细胞的抗病毒免疫应答过程。
　　3.体外感染实验发现EcBOK基因过表达能抑制病毒基因的转录与病毒的增殖。
　　以上结果显示，EcBOK在斜带石斑鱼抵御病毒感染过程中发挥了重要作用。本研究为揭示鱼类BOK基因的功能奠定了基础，也为进一步了解鱼类抗病毒免疫应答机制研究提供了新的方向。

目录

声明

1 文献综述

1.1 斜带石斑鱼简介及养殖现状

1.2 斜带石斑鱼免疫相关基因的研究现状

1.3 鱼类免疫系统的研究进展

1.4 虹彩病毒的研究进展

1.5 细胞凋亡

1.6 Bcl-2蛋白家族研究进展

1.7 BOK基因研究进展

1.8 本研究的目的及意义

2.1 前言

2.2 实验材料

2.3 实验方法

2.4 结果

2.5 讨论

3.1 前言

3.2实验材料

3.3 实验方法

3.4 实验结果

3.5 讨论

4.1 实验材料

4.2 实验方法

4.3 结果

4.4 讨论

5 结论

参考文献

附录

致谢

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