树突状细胞（DC）的培养及CEA-重组痘苗病毒转染DC诱导的特异性T细胞免疫

摘要

体外成功地完成了CD14+单核细胞来源的树突状细胞(DC)的培养,并进一步研究人癌胚抗原重组痘苗病毒(rV-CEA)转染DC后体外诱导的CEA特异性细胞免疫.首先,分离癌症患者的外周血单核细胞,分别加入:重组人粒-单集落刺激因子(rhGM-CSF)1000U/ml+IL-4500U/ml(A组)、 rHGM-CSF1000U/ml(B 组)及单纯含10﹪牛血清的RPMI1640(C 组).体外培养一周后,结果,癌症患者外周血中的单核细胞在rHGM-CSF 1000U/ml+IL-4500U/ml的条件下培养一周,就可看到典型的树突状细胞形态,其表面CD14分子表达减少,HLA-DR、CD54、CD40、CD83及CD86分子的表达明显增高,且具有明显刺激T细胞增殖的能力,成功地完成了外周血单核细胞来源的DC的培养.其次,用rV-CEa转染晚期大肠癌患者的DC,再激发自体T细胞,然后检测T细胞对CEA分泌性肿瘤细胞的体外杀伤活性,并与未经rV-CEA转染的DC激发的T细胞及野生型痘苗病毒转染的DC激发的T细胞进行对比.结果,经rV-CEA转染的DC激活的T细胞增殖力强,且对CEA分泌性肿瘤细胞具特异性杀伤活性.

目录

中英文对照及缩写

简单摘要

ABSTRACT

引言

材料及方法

一、实验材料

二、实验方法

实验结果

一、DC细胞的形态

二、DC细胞的表面标志

三、3种方法培养的单核细胞对自体T淋巴细胞的刺激增殖作用

四、免疫组化方法检测转染了rV-CEA的DC细胞膜上表达CEA膜蛋白

五、5例大肠癌患者的DC，转染病毒后对自体T细胞的刺激增殖作用

六、MTT法检测转染了rV-CEA的DC激活的T细胞对CEA分泌性肿瘤细胞的特异性杀伤活性

分析与讨论

一、树突状细胞

二、突状细胞与肿瘤疫苗

三、MTT法检测细胞毒杀伤实验

结论

附图

参考文献

综述

研究生期间发表论文

致谢