大肠癌转移相关基因在RNA水平和蛋白质水平上的差异筛选

摘要

该研究采用一对国内外通用、遗传背景一致、人大肠癌高转移能力细胞株SW620和低转移能力细胞株SW480为实验对象,首先通过绘制生长曲线、体内转移及体外侵袭实验,观察长期传代对其转移表型的保持有无影响;其次,在RNA水平上,利用SSH和蓝白斑筛选技术构建大肠癌转移相关基因消减cDNA文库,再通过Differential Screening(DS)和Northern Blot对部分阳性克隆进行筛选验证,并对获得的差异片段的性质或功能进行初步分析;最后,在蛋白质水平上,利用2-DE技术获得两种细胞株的蛋白表达谱,通过软件分析选取一些蛋白差异点,酶解后利用MS初步确定其性质.该研究不仅有利于阐述大肠癌转移的分子机理,还能提供新的网上信息资源,并有望为临床上早期诊断、药物筛选和预后判断寻找新的靶点.

目录

中英文对照缩略语

前 言

第一部分大肠癌转移性细胞株相关生物学特性的研究

一.主要技术路线

二.材料与方法

三.实验结果

第二部分SSH和DS技术筛选大肠癌转移相关基因

一.主要技术路线

二、材料与方法

（一）材料

（二）mRNA的提取

（三）SSH实验步聚

（四）实验效率榆测评估

（四）消减cDNA文库的构建

(五)Differential Screening

(六)Northern Blot鉴定杂交效率

三.结果

1.mRNA质量鉴定结果

2.双链cDNA的合成与酶切结果

3.Tester ds cDNA与接头的连接效率分析

4.消减杂效产物的2次PCR结果

5.消减杂交效率分析

6.消减cDNA文库的构建及鉴定结果

7.Differential Screening鉴定差异表达片段

8.Northern验证结果

9.差异片段的测序结果分析

四.讨论

第三部分利用双向电泳和质谱技术筛选大肠癌转移相关蛋白

一.主要技术路线

二.材料与方法

三.结果

四.讨论

全文小节

参考文献

综述一消减抑制杂交及其在肿瘤研究中的应用

摘要

Abstract

1SSH技技术的原理和方法

2SSH技术的特点

3SSH技术在肿瘤研究中的应用进展

4SSH技术的应用展望

参考文献

综述二蛋白质组技术在大肠癌生物标志物筛选中的应用

摘要

英文文题

1 2-DE与大肠癌

2MS与大肠癌

3蛋白质芯片与大肠癌

4LCM与大肠癌

5蛋白质信息学与大肠癌

6小结

参考文献

在读期间以第一作者发表的文章

致谢