柴胡疏肝汤对戊四氮致痫鼠脑电及癫痫相关调控因子的影响

摘要

立论依据: 目前关于癫痫的发生机制尚不清楚。随着分子生物学技术的飞速发展及其向神经学科的不断渗透，近年来大量的研究表明，癫痫的发生与脑内多种调控基因的失调密切相关。癫痫的发作是因神经元兴奋性增加所致过度同步化发放的结果，而即早基因c-fos、c-jun在神经元活动时表达活跃，被广泛用做神经元活动的标志物，在癫痫研究中被大量应用。癫痫时Fos蛋白的改变，代表了神经元的兴奋状态，在神经细胞凋亡及突触的可塑性机理中发挥作用。海马硬化是颞叶癫痫中最受关注的病理改变，海马硬化的改变与癫痫发作所致的神经细胞凋亡关系密切。bcl-2和bax是一对正负凋亡调节基因，在中枢和外周神经系统的神经元中均有表达。bcl-2基因能阻遏多系统及多种损伤和刺激引起的细胞凋亡，延长细胞的生存期，bcl-2的表达可显著地抑制过氧化物及自由基增加所诱导的细胞凋亡。bax蛋白既能和bcl-2形成异源二聚体使bcl-2蛋白失活，对细胞凋亡有促进作用，又可以自身形成同源二聚体，直接促进凋亡。bcl-2/bax的比值决定细胞对凋亡刺激的易感性，决定细胞的存活与否，其比值下降促进细胞凋亡，比值升高抑制细胞凋亡。因此探明影响癫痫发生发展的相关基因的功能、调控机制及药物防治，对从基因水平揭示癫痫的发病机制和治疗具有重要意义。 癫痫最主要的治疗是控制发作。用近代有效抗癫痫药物可使约80％的癫痫病人发作能获控制，但常用的抗癫痫西药均存在毒副作用。祖国医学是一个伟大的宝库，中医药治疗癫痫具有疗效确切、毒副作用少等优势，值得研究和开发应用。 中医药治疗癫痫具有悠久的历史，多年来人们对癫痫的治疗主要是按从风、从痰来治疗，然而疗效不理想。柴胡疏肝汤治疗癫痫是癫痫治疗理论上的创新与突破。近年来陈宝田教授对癫痫的病机有了新的认识，认为癫痫的发作是由于肝气暴郁所致，主张痫病从肝论治。并创立了柴胡疏肝汤，由柴胡、桂枝、生龙骨、生牡蛎、川芎、当归、生地、白芍、半夏、黄芩、党参、钩藤、生姜、大枣、甘草共十五味药组方而成。并且在临床上应用柴胡疏肝汤治疗大量难治性癫痫病人，获效良好。为了探寻获取更多的科学实验证据，以便临床上更广泛地推广和应用柴胡疏肝汤，造福广大癫痫病人，我们展开了柴胡疏肝汤治疗癫痫的相关动物实验研究。 研究内容: 1.戊四氮诱导癫痫大鼠模型的建立 2.柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠脑电的影响 3.柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠海马及额叶皮质c-fos表达的影响 4.柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠海马及额叶皮质bax、bcl-2表达的影响 结论: 1.亚致痉剂量(37.5mg/kg)的戊四氮能成功诱导出癫痫大鼠，造模成功率高达91％，所造癫痫模型大鼠能观察到痫性发作，且皆有稳定的痫性放电。 2.中、高剂量的柴胡疏肝汤、德巴金和定痫丸均对癫痫大鼠有良好的治疗作用，各组间无显著性差异，皆能成功地控制癫痫大鼠的痫性发作，对癫痫大鼠的痫性放电有改善作用。而低剂量的柴胡疏肝汤未能成功控制癫痫大鼠的痫性发作，治疗效果不好，可能与药物剂量不足有关。 3.中、高剂量的柴胡疏肝汤、德巴金和定痫丸能显著降低癫痫大鼠海马和额叶皮质c-fos的表达，低剂量的柴胡疏肝汤降低大脑皮层和海马c-fos的表达不明显。柴胡疏肝汤的抗痫作用机制可能与降低脑内c-fos表达水平有关。 4.正常大鼠和癫痫模型大鼠都存在神经细胞凋亡现象，癫痫大鼠的神经细胞凋亡尤为明显。癫痫大鼠海马和额叶皮质bax表达明显增加，中、高剂量的柴胡疏肝汤、德巴金和定痫丸可降低bax表达，提高bcl-2/bax的比值，显著减少癫痫大鼠凋亡细胞百分数；低剂量的柴胡疏肝汤对癫痫大鼠的凋亡细胞百分数减少不明显，也未能明显提高bcl-2/bax的比值。柴胡疏肝汤、德巴金、定痫丸可通过减少癫痫大鼠神经凋亡细胞百分数，提高bcl-2/bax的比值而起到良好的抗癫痫作用。 5.中、高剂量的柴胡疏肝汤均对癫痫大鼠有良好的治疗作用，两组之间无显著性差异，而低剂量的柴胡疏肝汤治疗效果差，在疗效上柴胡疏肝汤中、高剂量组优于低剂量组，具有显著性差异。中、高剂量的柴胡疏肝汤、德巴金和定痫丸均对癫痫大鼠有良好的治疗作用，在疗效上各组间无显著性差异。 6.柴胡疏肝汤治疗癫痫比定痫丸更具有优势。柴胡疏肝汤治疗癫痫是癫痫治疗理论上的创新与突破，是根据痫病的病机根本出发来治痫，是从“本”上来治疗痫病；而定痫丸是从痫病发生后所产生的痰浊、瘀血等病理产物的角度出发来治痫，是治痫病之“标”。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一章 戊四氮诱导慢性癫痫大鼠模型的建立

1.1实验动物及主要试剂

1.2给药方法

1.3观测指标

1.4实验结果

讨论

参考文献

第二章 柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠脑电的影响

1材料和方法

2结果

讨论

参考文献

第三章 柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠海马及额叶皮质c-Fos表达的影响

1材料和方法

2结果

讨论

参考文献

第四章 柴胡疏肝汤对戊四氮致痫大鼠海马及额叶皮质Bcl-2、Bax表达的影响

1材料和方法

2结果

讨论

参考文献

全文结论和建议

英文缩略词表

博士期间参编的论著和发表的论文

痫病的中医诊治进展

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