姜黄素对鼻咽癌NCE细胞的抗增殖效应及其诱导凋亡机制

摘要

目的及研究背景 鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma，NPC)发病居头颈部恶性肿瘤之首，也是我国南方地区高发的恶性肿瘤，发病年龄以40～50岁为高发组。单纯放疗仅适合于早期鼻咽癌，大多数鼻咽癌患者就诊时多为晚期(Ⅲ+Ⅳ期约占85％)，中晚期或复发转移的患者，目前采用放化疗相结合的治疗手段。头颈部恶性肿瘤常选用以DDP+5-FU为基础的化疗方案，是治疗鼻咽癌的最有效药物之一，但由于年龄及本病的特点，患者往往不能耐受现有大剂量化疗和放疗。 姜黄素(Curcumin，Cur)系从姜科植物姜黄中提取的酚性有效单体化合物，有抗氧化、抗突变、抗促癌、抗炎等广泛的药理作用，且价格低廉，毒性很低。关于该药对鼻咽癌细胞作用的研究，国内外的相关报道较少。本课题研究姜黄素对鼻咽癌NCE细胞增殖的抑制作用，及其诱导NCE细胞凋亡的机制，为姜黄素的临床应用提供实验依据、奠定理论基础。 方法 1.观察姜黄素对鼻咽癌NCE细胞增殖的影响：应用MTT比色法、集落形成实验等检测姜黄素对鼻咽癌NCE细胞增殖能力的影响。 2.研究姜黄素对鼻咽癌NCE细胞凋亡的诱导作用：应用AO/EB复合染色、电镜、DNA片段化分析、TUNEL方法等检测姜黄素对鼻咽癌NCE细胞凋亡的诱导作用。 3.探讨姜黄素诱导鼻咽癌NCE细胞凋亡的分子机制。 ①应用FCM探讨姜黄素对NCE细胞线粒体膜电位(△ψm)和Caspase3酶活性的影响。 ②应用Westernblot技术检测姜黄素对胞浆CytC蛋白表达的影响。 ③应用流式细胞术(FCM)、RT-PCR等方法探讨姜黄素对FasmRNA及蛋白表达的影响。 结果 1.姜黄素可明显抑制NCE细胞增殖：MTT比色法、集落形成实验均显示：25μmol/L浓度的姜黄素即能抑制NCE细胞增殖，且随着药物浓度的升高该抑制作用明显增强，呈量效关系。 2.姜黄素可诱导NCE细胞凋亡：AO-EB染色可见NCE细胞核内浓缩聚集的染色质，呈现凋亡表象；电镜下可观察到线粒体肿胀、凋亡小体等细胞凋亡的超微结构改变；DNA片段化分析可见典型的DNA降解“梯状”条带片段；TUNEL检测可见明显的棕色核凋亡细胞，与姜黄素共孵育12h、24h、48h的阳性率分别为25.6％、40.3％、54.5％。上述结果提示姜黄素可诱导NCE细胞凋亡。 3.姜黄素可启动NCE细胞线粒体凋亡途径和膜死亡受体途径： ①FCM检测示：姜黄素处理后NCE细胞△ψm下降，12h、24h、48h时的细胞阳性率分别是26.8％、42.3％、68.2％。Caspase3酶活性增强，12h、24h、48h时的细胞阳性率分别是80.5％、100％、100％。 ②Westernblot检测示：姜黄素处理后，NCE细胞胞浆Cyt-C蛋白表达逐渐增强，48h达到峰值。 ③FCM检测示：与姜黄素共孵育12h、24h、48h后，NCE细胞的Fas蛋白表达率明显升高。RT-PCR显示FasmRNA表达增强，并随作用时间的延长表达上调。 结论 姜黄素可抑制鼻咽癌细胞株NCE细胞增殖并诱导其凋亡。姜黄素可能一方面通过降低线粒体跨膜电位、释放CytC，启动线粒体凋亡途径；另一方面也可上调Fas基因、使Fas蛋白表达增加，启动膜死亡受体途径。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分姜黄素对鼻咽癌NCE细胞增殖的抑制作用

第二部分姜黄素诱导鼻咽癌NCE细胞凋亡机制的研究

结论

附录英文缩写词对照表

成果

综述姜黄素抗肿瘤机制研究进展

致谢

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