他克莫司，雷帕霉素及抗白介素-2抗体对胰岛移植糖尿病小鼠长期存活效果的研究

摘要

研究背景：Ⅰ型糖尿病(IDDM)是一种以胰岛β-细胞破坏为特征的、有多种发病机制的自身免疫性疾病，常导致肾功能衰竭、视网膜及神经系统的病变。严格的控制血糖是Ⅰ型糖尿病患者最有效的防止和减少慢性并发症的途径，为了实现这个目标，糖尿病患者必须接受严格的复合胰岛素治疗及准确的血糖监测。外源性的胰岛素替代治疗虽然能够成功的防治糖尿病急性并发症，减少死亡，但对于糖尿病慢性并发症无效，而且，外源性胰岛素从来未能接近正常细胞分泌模式，即使在无低血糖期，血糖也很少控制在正常范围。因此胰岛细胞的移植能够具有在不增加低血糖发生的情况下阻止糖尿病并发症的进展的作用。胰岛移植长期以来被认为是治疗Ⅰ型糖尿病的一种颇具吸引力的疗法，并具有相当的优势。为了研究胰岛移植中tacrolimus,rapamycin和AntiIL-2antibody在啮齿类动物之间防止排斥反应的机理和现象，本课题选用Wistar大鼠为胰岛移植物的供体，C57BL/6(B6)作为移植受体，移植物经分离和纯化后被移植入受体小鼠的肾包膜下，为了更好的模拟临床胰岛移植的效果，根据EdmontonProtocol方案进行用药。小鼠被随机的分为5组，依次是：control组，tacrolimus+rapamycin组，tacrolimus+AntiIL-2antibody组，rapamycin+AntiIL-2antibody组，tacrolimus+rapamycin+AntiIL-2antibody组. 实验方法：供体胰岛分离和纯化采用Wistar大鼠进行，胰腺组织经胶原酶P消化，通过Ficoll梯度离心分离纯化之后，在37℃(98.6°F)，5％的二氧化碳温箱中孵育不超过2小时，将分离纯化后的胰岛细胞移植入C57BL/6(B6)受者小鼠肾包膜下，每只小鼠移植300-400个胰岛为宜。移植后每周三次对各组小鼠应用血糖仪进行尾静脉采血，测量血糖，每周三次，连续100天受体血糖水平不超过18mmol/L，即为长期存活。组织学检查：于胰岛细胞移植第10天和第105天小鼠肾脏做病理切片，10％甲醛包埋，石蜡包埋，苏木精-伊红染色，镜下观察组织学变化。糖耐量试验：术后两周，进行糖耐量试验，所有受体B6小鼠均给予20％葡萄糖(1g/kg体重)腹腔内注射，于注射前和注射后30，60，90，120min测定血糖，并与对照组糖尿病小鼠做统计学两两比较。外周血CD4+，CD4+T细胞亚群及IL-2含量试验并进行统计学分析。 结果：应用不同免疫抑制剂方案后，移植受体存活时间比较应用不同免疫抑制剂方案后，移植受体平均存活时间如下表，一般认为移植物存活时间超过100天即为长期存活。可以看出应用Tacrolumus+Rapamycin的组，存活时间约为140天左右，85.7％的小鼠存活时间超过100天，明显高于对照组(P=0.000)，具有显著性差异(表6-1)；应用Tacrolumus+Rapamycin+AntiIL-2antibody的组(n=7)，移植受体存活时间平均约为161天左右，其中28.5％的小鼠存活时间超过200天，一只为109天，五只小鼠存活时间超过150天，两只超过200天，与对照组相比，(P＜0.001)，具有显著性差异。各组腹腔内注射葡萄糖后，对照组血糖浓度明显高于其他四组，60分钟以后，对照组血糖水平下降缓慢，直到120分钟仍然维持高血糖状态，恢复缓慢，另外四组中T+A+R联合用药组血糖最终恢复到糖耐量试验前的水平，与对照组相比，有显著性差异，(P＜0.001)。 结论：根据Edmontonprotocol，选择性的应用Tacrolimus，Rapamycin，Anti-interleukin-2antibody三种药物，防治移植术后机体免疫系统的排斥反应，均不同程度的延长了移植物的存活时间，其中以三种药物联合应用，移植物存活时间最长。免疫抑制剂能够明显提高小鼠胰岛细胞移植的长期存活率，延长移植物存活时间，与对移植免疫排斥反应的抑制作用，并用各种相关指标显示出来。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一章Wistar大鼠胰岛细胞分离纯化及胰岛细胞移植的相关操作和各项指标观察

第二章免疫抑制剂联合治疗方案对胰岛细胞移植长期存活率的影响及各项指标观察

总结

全文小结

参考文献

附录

致谢

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