小分子RNA靶向抑制survivin基因在人胶质瘤细胞U251中表达研究

摘要

[目的] 为阐明survivin基因在人胶质瘤细胞中的表达与细胞凋亡以及细胞周期阻滞的关系，我们拟通过采用RNAi技术，通过靶向抑制survivin基因在人胶质瘤细胞U251中的表达，观察survivin基因沉默后U251细胞凋亡和细胞周期的变化，探索survivin基因沉默对胶质瘤细胞凋亡以及细胞周期的影响。 [结论] 本研究利用基于DNA的RNAi技术，构建出表达3条针对survivin基因的shRNA的重组载体pGenesil-survivin，并成功导入到人胶质瘤U251细胞，发现siRNA诱导的RNAi明显抑制了survivin基因在U251细胞的表达；表达3个shRNA的重组载体pGenesil-survivin诱导的RNAi明显强于表达单一shRNA的3个对照重组载体pG1、pG2、pG3所诱导的RNAi效力，提示在RNAi中采用表达针对靶基因多靶点的多条shRNA可以保证RNAi的高效性；研究显示，siRNA介导的靶向沉默survivin基因诱导了显著的凋亡和G2/M期细胞周期阻滞，提示采用siRNA介导的RNAi靶向抑制survivin基因诱导U251细胞凋亡和细胞周期阻滞，可能是胶质瘤基因靶向治疗的新的策略之一；进一步的研究显示，siRNA介导的靶向沉默survivin基因导致U251细胞发生凋亡的具体机制，与沉默survivin基因所导致的激活caspase-3切割其底物PARP引起细胞发生caspase依赖的凋亡，以及解除survivin蛋白对p53基因活性的抑制，引起p53蛋白激活导致BCL-2家族中的凋亡促进剂BAX分泌到线粒体膜释放细胞色素C，从而激活凋亡有关。 本课题采用DNA载体介导的RNAi技术，通过靶向抑制survivin基因在胶质瘤细胞中的表达，探索研究survivin基因沉默对胶质瘤细胞凋亡以及细胞周期的影响，阐明了survivin基因表达对胶质瘤抗凋亡作用以及促进细胞周期进展的作用以及影响；同时，研究survivin基因沉默导致胶质瘤细胞凋亡以及信号转导的细胞转导机制，探索survivin基因在胶质瘤中的凋亡相关信号转导通路。本项目着眼于胶质瘤基因治疗的全新分子靶点survivin，通过探索survivin基因沉默在人胶质瘤细胞中对细胞凋亡和细胞周期的影响研究，可为靶向survivin基因的胶质瘤的基因治疗提供充足的理论和实验依据，并研究采用DNA载体介导的RNAi靶向沉默survivin基因在人胶质瘤基因治疗中的可行性，可能为RNAi介导的胶质瘤基因治疗提供全新的切入点，对于促进胶质瘤的基因治疗，有着重要的意义。

目录

文摘

英文文摘

前言

第一部分 靶向抑制suvivin基因的短发卡RNA表达载体的构建及转染

第二部分 靶向survivin基因短发卡RNA对U251细胞凋亡

第三部分 靶向survivin基因短发卡RNA对U251凋亡和细胞周期影响

第四部分 survivin沉默诱导U251细胞凋亡的凋亡通路

全文结论

附录

综述一 神经胶质瘤基因治疗的研究进展

综述二Survivin基因与恶性胶质瘤

综述三RNA干扰和肿瘤基因治疗

攻读博士学位期间撰写和发表的论文

致谢

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