抗原基因密码子及其表达载体的优化增强H5亚型禽流感DNA疫苗的免疫保护效果

摘要

禽高致病力禽流感(HPAI)被国际兽医局列为A类烈性传染病.近年来发现,H5和H7亚型高致病力禽流感病毒(HPAIV)不但可给养禽业造成巨大损失,而且可以感染人并致人死亡,HPAI作为一种新的人畜共患病,具有重要的公共卫生学意义,对HPAI的防制是关系养禽业健康发展与人类生命安全的重大课题.该研究首次证实DNA疫苗在鸡体内可诱导长期持续的高水平保护性HI抗体,并首次证明HA基因密码子的优化以及鸡β-actin启动子表达载体pCAGGS可显著提高H5亚型禽流感DNA疫苗诱导的保护性抗体免疫反应水平,增强免疫保护效果,同时证明,通过密码子和载体的优化,可使H5亚型禽流感DNA疫苗有效免疫保护剂量降低至l0μg水平,其推广应用已具备充分的经济可行性.pCAGGoptiHA作为免疫效果良好、成本低廉的优化DNA疫苗,有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗.

目录

文摘

英文文摘

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引言

1禽流感流行历史及现状

1.1 LPAI

1.2 HPAI

1.3我国AI流行历史

2 AI的公共卫生意义

2.1与人流感相关的禽流感事件

2.2产生导致人流感大流行病毒株的可能机制

3禽流感的疫苗防制

3.1禽流感疫苗的研究与应用历史

3.2几种主要的禽流感疫苗

4 DNA疫苗研究进展

4.1与动物病原相关的DNA疫苗

4.2 DNA疫苗的免疫机理

4.3 DNA疫苗的优化

小结

实验一表达H5亚型HA基因的DNA疫苗对HPAIV攻击的免疫保护效果及保护性抗体持续期研究

摘要

引言

1材料与方法

1.1病毒

1.2 SPF鸡胚和SPF鸡

1.3 DNA疫苗质粒

1.4 HI阳性抗原

1.5 DNA疫苗质粒的大量制备及其纯化

1.6免疫

1.7攻毒

1.8抗体测定

1.9病毒分离

1.10pCIHA的HI抗体持续期测定

2结果

2.1不同剂量pCIHA免疫对H5亚型HPAIV攻击的免疫保护结果

2.3 pCIHA免疫后诱导产生的HI抗体至少可以持续一年

3讨论

实验二密码子优化的H5亚型HA基因构建及其DNA疫苗表达载体优化与体外表达研究

摘要

引言

1材料与方法

1.1菌种及质粒

1.2酶及相关试剂

1.3培养液

1.4 H5亚型阳性血清

1.5二抗

1.6 H5亚型HA基因鸡体偏嗜性密码子的改写与序列分析

1.7用于OE-PCR的寡核苷酸片段和引物的合成

1.8 optiHA基因11个小片段的OE-PCR扩增

1.9 optiHA基因11个小片段的克隆

1.10基因optiHA的构建策略

1.11基因optiHA的PCR鉴定及酶切分析

1.12基因optiHA的测序验证

1.13表达质粒pCAGGHA、pCIoptiHA及pCAGGoptiHA的构建

1.14质粒pCIHA、pCAGGHA、pCIoptiHA及pCAGGoptiHA在293T细胞中的表达

2结果

2.1基因optiHA分段酶切位点

2.2 optiHA基因小片段的OE-PCR扩增

2.3 optiHA基因小片段的克隆与测序

2.4基因optiHA的PCR鉴定及酶切分析

2.5基因optiHA的测序验证

2.6质粒pCAGGHA、pCIoptiHA及pCAGGoptiHA的构建

2.7质粒转染293T细胞的间接免疫荧光结果

2.8HA蛋白在293T细胞中的表达产物检测

3讨论

实验三抗原基因密码子及其表达载体的优化增强H5亚型禽流感DNA疫苗免疫保护效果

摘要

引言

1材料与方法

1.1病毒

1.2 SPF鸡胚和SPF鸡

1.3 DNA疫苗质粒

1.4 HI阳性抗原

1.5 DNA疫苗质粒的大量制备及其纯化

1.6 SPF鸡的免疫

1.7攻毒

1.8抗体检测

1.9病毒分离与滴定

2结果

2.1单次免疫试验

2.2加强免疫试验

3讨论

结论

参考文献

致谢

本研究受以下课题资助

Curriculum Vitae