奶牛子宫内膜炎致病菌分析与植物精油对主要致病菌的抑制效果研究

摘要

细菌感染是诱发奶牛子宫内膜炎主要因素，由于抗生素的广泛使用使得耐药菌株的不断产生，严重影响畜牧业的发展。通过筛选出具有多重耐药性和致病性的临床型奶牛子宫内膜炎致病菌株，进而筛选出对临床致病菌株具有较好抑菌效果的植物精油。为进一步防治奶牛子宫内膜炎和新兽药的开发提供技术基础。本研究从4省7个奶牛场采集了67份临床型子宫内膜炎患病奶牛的子宫粘液，并完成细菌分析、致病性和耐药性试验、以及植物精油对主要致病菌的体外抑菌试验研究。结果如下:
　　1.临床型子宫内膜炎患病奶牛子宫黏液中细菌的分析
　　通过对奶牛子宫内膜炎样品进行细菌分离与鉴定，获得共计19种类型104株细菌。其中，混合感染为38.33％，单一感染为61.67％。大肠杆菌、化脓隐秘杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌是患病奶牛子宫黏液中的主要分离菌株。
　　2.患病奶牛子宫黏液中主要分离菌的致病性与耐药性研究
　　分离菌对昆明系小白鼠有致病性表明，大肠杆菌和化脓隐秘杆菌是临床型奶牛子宫内膜炎的主要致病菌。大肠杆菌和化脓隐秘杆菌对多种抗生素的体外药敏试验表明，50％以上的大肠杆菌对氨苄西林等4种药物具有耐药性;50％以上的化脓隐秘杆菌对培氟沙星等5种药物具有耐药性。
　　3.植物精油对耐药菌株的体外抑菌效果的研究
　　以耐药大肠杆菌和化脓隐秘杆菌作为供试菌株，利用滤纸片法测定了13种天然植物精油的抑菌活性并比较评价，初选出多各种具有良好抑菌效果的植物精油。采用倍比稀释法，测定初步筛选出的精油对其相应菌种的最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)。试验结果表明，百里香油和薰衣草油可作为防治奶牛子宫内膜炎药物的有效成分。
　　4.患病奶牛子宫粘液中鲍曼不动杆菌的研究
　　本研究首次从患有临床型子宫内膜炎奶牛的子宫粘液样品中分离到1株鲍曼不动杆菌，且具有较强的多重耐药性和较高的致死率。

目录

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 奶牛子宫内膜炎研究的概况

1．1．1 奶牛子宫内膜炎概况

1．1．2 奶牛子富内膜炎的致病因素

1．1．3 奶牛子宫内膜炎的诊断

1．1．4 非中药治疗奶牛子宫内胰陵的研究

1．1．5 中药治疗奶牛子宫内膜炎的研究

1．2 植物精油的研究概况

1．2．1 植物精油的分类

1．2．2 植物精油的提取

1．2．3 精油的药理活性

1．2．4 七种精油的研究简况

1．3 研究的目的与意义

第二章 临床型子宫内膜炎患病奶牛子宫粘液中细菌的分析

2．1 试验材料

2．1．1 子宫粘液的来源

2．1．2 主要试剂

2．1．3 溶液的配制

2．1．4 主要仪器

2．2 试验方法

2．2．1 临床型奶牛子宫内膜炎的诊断

2．2．2 子宫粘液样品的采集

2．2．3 样品的光密度检查(ULSOD)

2．2．4 样品的增菌

2．2．5 细菌的分离与纯化

2．2．6 细菌的16S rDNA鉴定

2．2．7 VITKE-2 COMPACT15自动生化鉴定试验

2．3 试验结果

2．3．1 样品采集结果

2．3．2 样品的外观检查结果

2．3．3 样品的光密度检测结果(ULSOD)

2．3．4 镜检结果

2．3．5 分离菌株的165 rDNA扩增结果

2．3．6 分离菌株的鉴定结果

2．3．7 菌株的感染类型

2．4 分析与讨论

2．5 小结

第三章 患病奶牛子宫粘液中鲍曼不动杆菌的研究

3．1 试验材料

3．1．1 菌株来源

3．1．2 主要试剂

3．1．3 试验动物

3．1．4 药敛纸片

3．2 试验方法

3．2．1 细菌DNA提取

3．2．2 细菌16S rDNA鉴定

3．2．3 细菌16S rDNA序列比对分析

3．2．4 生化试验

3．2．5 药敏试验

3．2．6 致病性试验

3．3 试验结果

3．3．1 细菌16S rDNA鉴定结果

3．3．2 生化鉴定结果

3．3．3 药敏试验结果

3．3．4 致病性试验结果

3．4 分析与讨论

3．5 小结

第四章 患病奶牛子宫粘液中主要分离菌的致病性与耐药性研究

4．1 试验材料

4．1．1 菌株来源

4．1．2 培养基

4．1．3 主要试剂

4．1．4 主要仪器

4．1．5 试验动物

4．1．6 药敏纸片

4．2 试验方法

4．2．1 致病性试验

4．2．2 药敏试验

4．3 试验结果

4．3．1 致病性试验结果

4．3．2 病原菌重分离结果

4．3．3 病理学观察结果

4．3．4 生化试验结果

4．3．5 药敏试验结果

4．4 分析与讨论

4．4．1 致病性研究

4．4．2 耐药性研究

4．5 小结

第五章 植物精油对耐药菌株的体外抑菌效果的研究

5．1 试验材料

5．1．1 菌株来源

5．1．2 精油来源

5．1．3 培养基

5．1．4 主要仪器

5．2 试验方法

5．2．1 植物精油的初筛选

5．2．2 精油对大肠杆菌的抑菌活性测定

5．2．3 精油对化脓隐秘杆菌的抑菌活性测定

5．2．4 精油对a-溶血性链球菌的抑菌活性测定

5．3 试验结果

5．3．1 植物精油的初筛选结果

5．3．2 精油对大肠杆菌的抑菌活性测定结果

5．3．3 精油对化脓隐秘杆菌的抑菌活性测定结果

5．3．4 精油对a-溶血性链球菌的抑菌活性溅定结果

5．4 分析与讨论

5．5 小结

第六章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历