牛副结核分枝杆菌多组分亚单位疫苗的初步研究

摘要

副结核病(Paratuberculosis)是由禽分枝杆菌副结核亚种（Mycobacterium avium subsp Paratuberculos坫，MAP）引起的危害严重的传染性疾病，该病在世界各国均有发生，在我国也是最常见的多发性疾病，对于该病的控制措施，只有少数国家采用检疫后扑杀的策略，但该策略并不适用于所有的国家和地区。目前，全世界只有商品化灭活疫苗，该苗能够减少病原体的排泄，但并不能完全阻断副结核菌感染，因此研发高效疫苗非常必要。
　　本研究探索了两个多组分(MAP培养上清、MAP细胞壁)疫苗的功效，比较了沙门氏菌菌蜕(Ghost)佐剂和弗氏不完全佐剂(Incomplete Freund Adjuvant，IFA)对这些多组分疫苗的免疫增强效果，同时以MAP灭活苗+铝盐佐剂做对比，并对免疫后小鼠进行攻毒评价，以期筛选出免疫效果最佳的疫苗。
　　实验结果表明，MAP细胞壁组在一免时就能产生较高水平的免疫效价，二免、三免后效价持续升高，且抗体水平明显高于MAP培养上清组和MAP灭活苗组;MAP培养上清组在二免后抗体水平明显高于PBS对照组，而MAP灭活苗组在三免后抗体水平明显高于PBS对照组。三免后MAP细胞壁组IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10分泌量明显高于MAP培养上清组和MAP灭活苗组;MAP培养上清组和MAP灭活苗组IL-2、IFN-γ、IL-4、Il-10分泌量明显高于PBS对照组，表明MAP细胞壁组引起的免疫应答要强于MAP培养上清组和MAP灭活苗组。三免后的攻毒结果显示，MAP细胞壁免疫组小鼠的肝脏、脾脏、小肠中MAP的荷菌量要少于MAP培养上清组和MAP灭活苗组，且MAP细胞壁组中IFA佐剂组要好于Ghost组，表明MAP细胞壁组对感染MAP小鼠的保护效果要好于MAP培养上清组和MAP灭活苗组。而且，IFA组的抗体水平要高于沙门氏菌Ghost组，说明MAP细胞壁组、MAP培养上清组与佐剂IFA结合效果要优于沙门氏菌Ghost组。本研究为副结核病新型疫苗的研制奠定基础。

目录

声明

摘要

英文缩略表

1．1 副结核病的简介

1．1．1 副结核病病原学

1．1．2 副结核病流行病学

1．1．3 副结核病的诊断

1．1．4 副结核病的防控

1．1．5 副结核病的治疗

1．1．6 副结核病疫苗的研究现状

1．2 佐剂的应用

1．3 MAP分泌蛋白简介

1．4 MAP表面结构-细胞壁简介

1．5 研究的目的与意义

第二章 疫苗制备及其免疫效力的研究

2．1 实验材料

2．1．1 菌株及实验动物

2．1．2 主要试剂

2．1．3 主要仪器

2．2 实验方法

2．2．1 小鼠免疫及相关指标检测

2．2．2 小鼠攻毒实验及相关指标检测

2．3 实验结果

2．3．1 小鼠免疫相关指标检测结果

2．3．2 小鼠攻毒相关指标检测

2．4 讨论

第三章 结论

参考文献

致谢

作者简历