抗沙丁胺醇单克隆抗体制备、鉴定与初步应用研究

摘要

该研究将沙丁胺醇琥珀酸单酯化后应用混合酸酐法将之与牛血清白蛋白偶联,制备全抗原后免疫Balb/c小鼠,用杂交瘤技术建立了一株稳定分泌抗沙丁胺醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为1C<,2>F<,10>,并对1C<,2>F<,10>细胞进行了鉴定和抗体应用技术的深入研究.应用双向免疫扩散方法对1C<,2>F<,10>抗体进行鉴定,确定1C<,2>F<,10>抗体属IgG<,1>亚类;应用非竞争间接ELISA测定腹水抗体亲合力常数为1.0928×10<'10>1/mol,抗体与克仑特罗交叉反应为255,与莱克多巴胺的交叉反应小于0.1﹪.间接酶联免疫吸附试验测定细胞上清抗体效价为1:3.2×10<'5>,腹水抗体效价为1:6.4×10<'8>.秋水仙素阻抑汉计算该细胞染色体数平均为96,体外传代培养和冻存复苏后分泌抗体稳定.以1C<,2>F<,10>单抗为基础,对检测β-肾上腺素能兴奋剂的技术路线进行了初步研究,建立了间接竞争抑制ELISA方法,该方法对沙丁胺醇的最低检出限为1ng/ml,对克伦特罗有一定的检出经,检出限为5ng/ml,添加回收率为90﹪~105﹪.

目录

引言

1概述

1.1 BAA概述

1.2 β2-兴奋剂-沙丁胺醇

2 β2-兴奋剂的残留与危害

3 β2-兴奋剂的残留检测方法

3.1气相色谱-质谱联用技术(GC-MS)

3.2高效液相色谱技术(HPLC)

3.3免疫测定技术

4沙丁胺醇残留免疫检测方法的研究现状

材料与方法

1材料

1.1抗原、联结剂及试剂

1.2动物和细胞

1.3主要仪器

1.4玻璃器皿

1.5溶液系统

2方法

2.1沙丁胺醇全抗原合成

2.2多抗血清的制备、效价测定及检测方法的建立

2.3抗沙丁胺醇单克隆抗体的制备

2.4 SAL间接竞争性ELISA检测模式的建立

结果

1抗原合成及免疫效果

1.1抗原合成及免疫效果

1.2 BSA-SAL免疫兔血清中抗SAL抗体的效价

1.3 BSA-SAL免疫Balb/c小鼠血清中抗SAL抗体的效价

1.4 SAL对抗SAL抗体的抑制的反应

2检测方法的建立

2.1间接ELISA法确定抗原和阳性血清的工作浓度

2.2筛选方法的可行性分析

3单克隆抗体的制备

3.1细胞融合及筛选情况

3.2单克隆抗体的制备

4单克隆抗体的鉴定

4.1抗体效价的测定

4.2杂交瘤细胞株染色体分析

4.3单克隆抗体类及亚类鉴定

4.4抗体分泌稳定性

4.5灵敏度及交叉反应

4.6抗体亲合力的测定

4.7腹水抗体蛋白含量的测定

4.8抗体的一般特性

5试剂盒的研制和组装

5.1不同处理方法酶标板均匀的测定

5.2不同酶标板结合率的比较

5.3 SAL检测方法的建立

分析与讨论

1抗原

2 ELISA的筛选方法

3细胞融合及培养

4杂交瘤细胞的检测和克隆

5灵敏度及交叉反应

6试剂盒的研制

结论与展望

参考文献

发表论文

致谢