GFP-mTn嵌合基因对蓝猪耳的遗传转化及融合蛋白在蓝猪耳中的表达

摘要

蓝猪耳在其发育的四核期,胚囊从珠孔端伸出,当胚囊完全成熟时,助细胞、卵细胞和大部分中央细胞均暴露于胚珠组织之外,是研究被子植物受精和胚囊发育的模式植物.我们将嵌合基因gfp:mtn通过叶盘法导入蓝猪耳,探索了蓝猪耳遗传转化的方法和转基因苗的再生条件,建立了成熟的蓝猪耳转化系统.经激光共聚焦显微镜观察了转基因植株的各种不同组织中融合蛋白的表达和分布情况.在叶片的表皮细胞、保卫细胞、根部的皮层细胞中有融合蛋白的表达,保卫细胞中微丝标记状况良好,经光诱导处于开放态的气孔的保卫细胞微丝呈网状结构,在细胞内无规则分布;经黑暗诱导处于关闭态的气孔保卫细胞中微丝束沿保卫细胞纵轴排列,呈卷曲状分布.只有极少数的转基因植株在表皮细胞和根皮层细胞中有目的基因的表达.在转基因植株的其它部位,例如茎表皮细胞、根毛细细胞和花粉粒中,未检测到目的基因的表达.我们将外源基因成功地导入蓝猪耳,为利用转基因的手段研究被子植物受精和胚囊发育打下基础.获得的转基因植株也可以作为研究气孔运动过程中微丝动态变化的材料.

目录

文摘

英文文摘

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物种拉丁文（英文）中文名称对照表

文献综述

一.植物细胞中的肌动蛋白骨架

二.植物微丝骨架的标记

三.绿色荧光蛋白(Green Fluorescent Protein,GFP)

四.微丝骨架结合蛋白talin

五.蓝猪耳的遗传转化

材料和方法

一.实验材料

二.培养基配制及溶液配制

三.碱裂解法小量提取质粒DNA

四.感受态细胞的制备及转化：

五.表达载体向农杆菌中的转化阳性克隆的鉴定

六.农杆菌阳性克隆的PCR鉴定

七.蓝猪耳的遗传转化及转化植株的组织培养

八.转化体植株的鉴定

九.转基因植株的GFP-mTn的表达情况检测

实验结果

一.表达载体向农杆菌的转化和PCR检测扩增目的片段

二.蓝猪耳的遗传转化

三.转基因蓝猪耳的PCR检测

四.转基因蓝猪耳的形态学观察

五.GFP-mTn在转基因植株中的表达检测

结果分析

一.蓝猪耳的遗传转化

二.转化植株中目的基因的表达情况

三.蓝猪耳胚囊中微丝骨架活体标记

参考文献

致谢