NDV强毒株的分离鉴定与复合新城疫蜂胶灭活疫苗的研究

摘要

该研究从山东流行烈性传染病的鸡群中分离出7株具有血凝活性的病毒,该7株病毒的血凝活性均能被新城疫LaSota株标准阳性血清所抑制,但病毒不能被中和,仍能致死鸡胚.经分离鉴定,分离毒均为新城疫病毒株,通过鸡胚半数致死量(ELD<,50>)、最小致死量致死鸡胚的平均时间(MDT)、1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)、6周龄雏鸡静脉内致病指数(IVPI)、血凝解脱及血凝素稳定性试验等表明:7株分离毒株均为新城疫病毒强毒株,其毒力与标准强毒株F<,48>E<,9>株相似.对4株具有一定代表性的NDV分离株的F基因进行RT-PCR扩增和序列分析,根据基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中1株属于弱毒株,3株属于强毒株;核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明:3株强毒株与Clone30基因核苷酸序列的同源性在83.6﹪-84.0﹪之间;与F<,48>E<,9>典型NDV强毒株同源性在86.5.6﹪-88.3﹪之间,推导的氨基酸序列同源性与Clone-30株在85.9﹪-87.0﹪之间;与F<,48>E<,9>典型NDV强毒株在89.1﹪-91.3﹪之间;利用MegAlign软件绘制了NDV的系统发育进化树,其结果表明,3株分离强毒株为Ⅶ基因型,弱毒株为基因Ⅱ型.通过鸡胚接种的方法研究了蜂胶乙醇浸出物(EEP)对NDVClone-30株的灭活作用,结果表明,0.1-10mg/ml的蜂胶乙醇浸出物(EEP)对NDVClone-30株的灭活作用,并且这种灭活作用与温度、乙醇浓度成正比,在3-30min内与作用时间无关.用NDVClone-30株和分离毒株分别接种非免疫鸡胚,制备抗原液,经甲醛灭活后与纯化的天然免疫增强剂蜂胶乳化,研制成功复合新城疫蜂胶灭活疫苗,对制品的安全性和免疫原性进行了测定,对3-6周龄易感雏鸡以2倍使用剂量肌肉注射,安全性良好,对1日龄雏鸡接种1个使用剂量,进行急性毒性试验观测,15天生长曲线表明,对雏鸡无影响,对3-6周龄雏鸡注射1个使用剂量,每批疫苗免疫10只鸡,免疫5-32天鸡血清中ND血凝抑制(HI)抗体的几何平均滴度(GMT)分别为4.8-9.8log2,对鸡新城疫免疫攻毒试验表明,3批疫苗,每羽份含有的半数保护量(PD<,50>)分别为≥131和≥127.注射部位的动态病理组织学比较观察研究结果表明,蜂胶疫苗免疫后对局部组织学影响明显小于油乳剂苗.蜂胶疫苗的免疫期暂定为6个月;疫苗的保存期为-10℃不结冰,可保存18个月以上,4-8℃为12个月,15-20℃为6个月.田间试验与2亿羽份现场应用结果表明,疫苗安全可靠,效果良好.

目录

文摘

英文文摘

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英文缩略语表

第一章引言

1.1研究的目的和意义

1.2国内外研究现状（文献综述）

1.3研究内容和方法

第二章NDV强毒株的分离鉴定及生物学特性研究

2.1材料与方法

2.2结果

2.3小结与讨论

第三章 四株NDV分离株F基因的克隆与序列分析

3.1材料与方法

3.2结果与分析

3.3小结与讨论

第四章复合新城疫蜂胶灭活疫苗的研究

4.1材料

4.2方法和结果

4.3小结与讨论

第五章总结论

参考文献

附图与说明

致谢

作者简介