穿梭质粒pSP189/哺乳动物Vero细胞诱变检测系统的研究及应用

摘要

该研究将基于SV40病毒的短暂复制型穿梭质粒pSP189与非洲绿猴肾Vero细胞组成穿梭质粒/哺乳动物细胞诱变检测系统,并将该系统应用于兽药喹乙醇和喹烯酮的诱变性检测.该研究经阳离子脂质体转染法将pSP189质粒转染Vero细胞后,回收质粒转化宿主菌,获得每皿多于50个的转化子和1.9×10<'-4>的自发突变频率,试验结果表明该系统符合穿梭质粒诱变测试系统的要求.该研究用已知的直接阳性诱变物MNNG和间接阳性诱变物B(α)P分别对已建立的系统进行了验证,试验结果表明,MNNG以0.32μg·ml<'-1>的剂量诱发的突变频率较溶剂对照组高10.5倍,而B(α)P以1.1μg·ml<'-1>的剂量诱发突变频率较溶剂对照组高12倍,上述试验结果表明,已建立的系统检测已知阳性诱变物结果明显,该系统可用于诱变检测.质粒经6.6μg·m1<'-1>的喹乙醇处理后,转染Vero细胞,并从细胞中回收质粒转化E.coliMBM7070,试验结果表明,喹乙醇处理组的突变频率明显高于溶剂对照组.该研究又对突变子质粒靶基因进行序列测定,发现喹乙醇引起质粒靶基因核苷酸序列改变主要表现为点突变和连续缺失,且以引发点突变为主.质粒经1.90、3.75、7.5、15、30μg·ml<'-1>的喹烯酮处理后,将其转染Vero细胞,回收并转化E.coli MBM7070,试验结果表明,喹烯酮处理组的突变子数较溶剂对照没有明显的增加;试验又采用S<,9>将相同浓度的喹烯酮代谢活化后处理质粒,转染Vero细胞,经回收并转化E.coli MBM7070进行突变子筛选,试验结果表明,喹烯酮处理组的突变子数较阴性对照仍然没有明显增加,喹烯酮诱变检测结果阴性.

目录

文摘

英文文摘

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英文缩略语

第一章绪论

1.1穿梭质粒/哺乳动物细胞检测系统在致突变检测中的应用

1.2喹乙醇、喹烯酮综述

1.3研究的目的和意义

第二章穿梭质粒pSP189/哺乳动物Vero细胞诱变检测系统的建立

2.1材料

2.2方法

2.3结果与分析

2.4讨论

2.5小结

第三章穿梭质粒pSP189/哺乳动物Vero细胞诱变检测系统的应用

3.1材料

3.2方法

3.3结果与分析

3.4讨论

3.5小结

第四章结论与建议

4.1结论

4.2建议

参考文献

致谢

附录