实时荧光RT-PCR快速检测高致病性禽流感病毒（HPAIV）H5亚型

摘要

本项目利用实时荧光RT-PCR的高敏感性和反应体系的封闭性建立了实时荧光RT-PCR检测方法以进一步提高检测方法的敏感性和特异性。根据HPAIVH5血凝素(HA)基因保守区序列，合成了70对引物和4条探针，经过引物、探针筛选优化、反应体系、无机离子浓度、反转录酶筛选及浓度优化、Taq酶浓度优化等一系列的试验，建立了直接从禽肉组织中快速检测高致病力禽流感病毒H5亚型的实时荧光RT-PCR方法。以4株H5亚型高致病力禽流感病毒的感染性尿囊液经稀释后进行荧光RT-PCR检测，敏感性达10-6～10-7；对鸡肉或鸭肉中可能存在的鸡传染性贫血因子、鸡传染性法氏囊病毒、传染性支气管炎病毒(H120、H52、肾型传支)、新城疫强毒和疫苗毒、H9亚型禽流感病毒、鸭瘟病毒、鸭传染性肝炎病毒进行检测，结果均为阴性。表明：建立的检测方法敏感性高、特异性强。与国际标准方法—国际兽疫局(OIE)确定的鸡胚病毒分离相比，将检测时间从原来最短需要21天大大缩短为4小时。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：资助、符号与缩略语

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章引言

1.1国内外研究概况

1.2研究的目的意义

1.3研究内容

第二章实时荧光RT-PCR快速检测高致病性禽流感病毒H5亚型方法的建立

摘要

2.1前言

2.2材料与方法

2.3结果与分析

2.4讨论

2.5小结

第三章实时荧光RT-PCR对人工感染HPAIV H5的SPF鸡、肉鸡、肉鸭肌肉组织和各脏器中病毒的检测

摘要

3.1前言

3.2材料与方法

3.3结果与分析

3.4讨论

3.5小结

第四章HPAIV H5自然发病鸭场不同检样实时荧光RT-PCR的检测

摘要

4.1前言

4.2材料与方法

4.3结果与分析

4.4讨论

4.5小结

第五章实时荧光RT-PCR检测HPAIV H5方法的实际应用

5.1前言

5.2材料与方法

5.3结果与分析

5.4小结及讨论

结论

创新点

致谢

附录

附录Ⅰ.高致病性禽流感病毒株的标准

附录Ⅱ.实时荧光RT-PCR检测图

附录Ⅲ.禽流感病毒H5亚型血凝素基因

个人简介