转反义LeEIL2基因番茄植株鉴定及采后生理特性的研究

摘要

本实验室人员在研究LeEIL2基因序列的基础上，克隆得到LeEIL2基因序列，成功构建了反义LeEIL2植物表达载体，利用农杆菌介导法进行遗传转化，成功获得了98株具有抗性的转反义LeEIL2基因番茄植株。本研究对具有抗性的转反义LeEIL2基因番茄植株进行了PCR检测和杂交鉴定，筛选出阳性植株，继而对阳性植株采后番茄果实及叶片的相关生理特性进行研究，希望能进一步认识LeEIL2基因在番茄成熟衰老进程及乙烯信号转导途径中的作用和生理功能。　　本实验主要进行了以下三方面的工作，并取得了相应的研究结果：(1)具抗性转反义LeEIL2基因番茄植株的移栽及鉴定：从生根培养基上筛选出长势较好的抗性苗，移入营养土中进行培养，进而定植于温室中。总共移植成活了98株具有抗性的转反义LeEIL2基因番茄植株。取番茄植株叶片进行PCR检测，初步获得72株PCR水平呈阳性的转基因植株。进而对这72株植株进行Southern杂交鉴定，最终获得了58株阳性转反义LeEIL2基因番茄植株。　　(2)转反义LeEIL2基因番茄植株果实采后生理特性研究：实验测定了与果实采后成熟衰老、品质变化及贮藏性能相关的一系列指标，如乙烯生成量、呼吸速率、果实硬度、可溶性固形物含量、番茄红素含量、激素含量、ACS和ACO活性等。测定结果从各个角度充分说明，转反义LeEIL2基因番茄果实与普通番茄相比，其果实的成熟衰老进程极大程度受到抑制，果实品质得以提高，果实耐贮性也相应增强。　　(3)转反义LeEIL2基因番茄植株离体叶片生理特性研究：实验对番茄植株离体叶片伤乙烯、膜透性和叶绿素含量分别进行了测定。结果显示转反义LeEIL2基因番茄与普通番茄相比，离体叶片伤乙烯释放受到抑制、叶绿素含量高于同时期普通番茄，并且膜电解质渗出率相应降低。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明和关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

1.1乙烯的生理作用及生物合成

1.1.1乙烯的生理作用

1.1.2乙烯的生物合成

1.2乙烯信号转导

1.2.1乙烯受体家族

1.2.2C7R1

1.2.3 EIN2

1.2.4乙烯反应元件及结合蛋白

1.2.5 EIN3基因及其编码蛋白的结构和功能

1.2.6乙烯感受和信号转导的调控模式

1.3研究目的与意义

第二章材料与方法

2.1材料与试剂

2.1.1植物材料

2.1.2番茄果实成熟度划分

2.1.3菌株、质粒、试剂

2.1.4常用试剂配制

2.1.5主要仪器设备

2.2转基因番茄植株鉴定

2.2.1PCR检测

2.2.2 PCR检测呈阳性的植株Southern blot检测

2.2.3转反义LeEIL2基因番茄果实生理生化指标测定

2.2.4转反义LeEIL2基因番茄叶片生理生化指标测定

第三章结果与分析

3.1转基因植株鉴定

3.1.1 PCR检测

3.1.2 PCR检测呈阳性的植株Southern blot检测

3.2转反义LEEIL2基因番茄果实生理生化指标测定

3.2.1番茄果实采后乙烯释放量和呼吸速率测定

3.2.2番茄果实硬度和可溶性固形物含量测定

3.2.3番茄果实番茄红素含量测定

3.2.4番茄果实PG和LOX活性测定

3.2.5番茄果实ACO、ACS活性及ACC含量测定

3.2.6番茄果实内源激素ABA、CTK、IAA含量测定

3.3转反义LEEIL2基因番茄叶片生理生化指标测定

3.3.1番茄植株叶片伤乙烯测定

3.3.2番茄叶片电解质渗出率、叶绿素含量的变化

第四章讨论

4.1 LEEIL2基因与乙烯、成熟衰老的相关性

4.2转反义LEEIL2基因番茄果实采后生理生化特性的研究

4.2.1果实采后乙烯释放量和呼吸速率的变化

4.2.2果实硬度和可溶性固形物含量的变化

4.2.3果实番茄红素含量的变化

4.2.4果实PG和LOX活性的变化

4.2.5果实ACO、ACS活性及ACC含量的变化

4.2.6果实内源激素ABA、CTK、IAA含量的变化

4.3转反义LEEIL2基因番茄离体叶片生理生化特性的研究

第五章结论

5.1具抗性转反义LeEIL2基因番茄植株的移栽种植及鉴定

5.2转反义LeEIL2基因番茄植株果实采后生理特性研究

5.3转反义LeEIL2基因番茄植株离体叶片生理特性研究

参考文献

致谢

附录

个人简介