枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）WY45产β-甘露聚糖酶的纯化与性质研究

摘要

本文研究了通过筛选得到的枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WY45产甘露聚糖酶的发酵条件，并对其所产甘露聚糖酶进行了分离纯化，同时对纯酶的酶学性质进行了研究。 主要结果有：1.枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WY45液体发酵产生甘露聚糖酶，发酵培养基经优化后，在4％的魔芋精粉为碳源，1.33％的大豆蛋白胨为氮源，初始pH5.5，50℃培养96h的条件下，该菌产酶的酶活从初始的204u/m1提高到2800u/ml，优化提高了13.7倍，优化效果明显，且该酶活水平为现在已报道的同类酶中的最高水平。2.枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)WY45产甘露聚糖酶经60-90％硫酸铵沉淀，S-100凝胶过滤层析，QSFF离子交换层析等分离纯化步骤后得到电泳纯的纯酶，最终纯化倍数为6.08，酶活回收率为19.80％，经SDS-PAGE电泳测定该酶的分子量为44.47kDa。3.pH对该甘露聚糖酶活力的影响很大。该酶的最适反应pH为6.0，在5.5-6.5的范围内，酶的相对活力都在80％以上；当pH低于5.0和高于9.0时，活力显著下降。在40℃下，酶在所采用的pH5.0-11.0的范围内都很稳定。该酶的最适反应温度为65℃，大于65℃酶活力即迅速下降，70℃时酶活力水平已低于15％。大多数金属阳离子对该酶活力有提高的作用，特别是Co2+和Ni+。

目录

文摘

英文文摘

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第一章 绪论

1.1研究的目的和意义

1.1.1研究意义

1.1.2β-甘露聚糖酶的应用

1.2甘露聚糖及甘露聚糖酶的研究进展

1.2.1国外的研究进展

1.2.2国内的研究进展

1.2.3不同来源甘露聚糖酶主要性质比较

1.3本课题研究的内容和目标

第二章 枯草芽孢杆菌WY45产β-甘露聚糖酶发酵条件研究

2.1引言

2.2材料与方法

2.2.1菌株

2.2.2主要仪器设备

2.2.3主要试剂

2.2.4实验方法

2.3结果与讨论

2.3.1不同碳源对酶活力的影响

2.3.2不同氮源和碳氮比对酶活力的影响

2.3.3初始pH对酶活力的影

2.3.4发酵培养温度对酶活力的影响

2.3.5产酶历程

2.4小结

第三章甘露聚糖酶的纯化

3.1引言

3.2材料与方法

3.2.1主要仪器

3.2.2主要试剂

3.2.3甘露聚糖酶粗酶液的制备

3.2.4硫酸铵分级沉淀

3.2.5凝胶柱过滤层析

3.2.6离子柱交换层析

3.2.7SDS-PAGE鉴定酶的纯度及测定酶的分子量

3.2.7甘露聚糖酶活力的测定

3.2.8蛋白质含量测定

3.3结果与讨论

3.3.1硫酸铵分级沉淀

3.3.2凝聚过滤柱层析

3.3.3离子交换柱层析

3.3.4SDS-PAGE鉴定酶的纯度及测定酶的分子量

3.4小结

第四章甘露聚糖酶的酶学性质

4.1引言

4.2材料与方法

4.2.1主要试剂和仪器

4.2.2蛋白质的定量方法

4.2.3酶活力的标准测定方法

4.2.4最适pH和pH稳定性

4.2.5最适温度和温度稳定性

4.2.6金属离子和螯合剂(EDTA)对酶活力的影响

4.2.7底物特异性的测定

4.2.8酶解条件及酶解产物分析方法

4.3结果与讨论

4.3.1最适pH和pH稳定性

4.3.2最适温度和温度稳定性

4.3.3金属离子和螯合剂(EDTA)对酶活力的影响

4.3.4甘露聚糖酶的底物特异性

4.3.5甘露聚糖酶解特性

4.4 小结

第五章结论与建议

5.1本研究的主要结论

5.2建议

参考文献

致谢

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