鸡传染性法氏囊病毒河南H-1株VP2基因的克隆及原核表达

摘要

鸡传染性法氏囊病(InfectiousBursalDisease，IBD)是由传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的鸡的一种高度接触性传染病。IBDV的靶细胞是未成熟的B淋巴细胞或B前淋巴细胞，感染后很快发生变性和坏死。由于法氏囊是B细胞成熟的重要器官，鸡在感染IBDV后，淋巴滤泡内的B细胞大量裂解死亡，网状细胞呈凋亡过程，最终导致法氏囊等器官萎缩而引起免疫抑制，结果可使鸡群对其它疾病易感性增加，对疫苗(如新城疫、禽流感等)接种的免疫应答能力也下降，对养鸡业造成严重的经济损失。 VP2是病毒的重要结构蛋白，含有血清型特异的能诱导中和抗体的抗原决定簇，是病毒主要的宿主保护性免疫原。本试验应用RT-PCR技术，将从河南某鸡场分离并鉴定的传染性法式囊病毒分离株——IBDVH-1株，进行病毒VP2基因的克隆与表达。首先提取病毒总RNA，然后进行反转录和PCR反应，扩增得到1461bp大小的VP2蛋白基因。将扩增产物克隆入pGEM-T载体，构建了pTVP2重组质粒。序列分析表明，该VP2基因及推导氨基酸序列与日本和欧洲超强毒株序列有较高的同源性，特征性氨基酸变异相似，提示H-1毒株可能为超强毒株。进化分析也表明H-1毒株与欧洲超强毒株UK661和日本超强毒株OKYM位于同一进化分支，提示H-1株病毒可能为超强毒株。 将pTVP2载体中VP2基因，亚克隆于原核表达载体pET-28a，经双酶切和PCR鉴定，成功构建了VP2基因原核表达载体pETVP2。经IPTG诱导表达了53.7Kd的VP2蛋白。表达蛋白以包涵体形式存在于宿主菌中，能够与鸡IBDV抗血清特异性反应。本试验为进一步研究VP2蛋白的功能和研发相应的诊断技术奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明和关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

1 IBDV基因组及病毒结构

2 IBDV抗原性

3 IBDV发病机理

4 IBDV的毒力和变异

5 IBDV诊断

6 IBDV疫苗与免疫

第二章鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白基因克隆

1材料和方法

2结果

3讨论

第三章鸡传染性法氏囊病病毒VP2蛋白的原核表达

1材料与方法

2结果

3讨论

第四章结论

参考文献

致 谢

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