动物组织中氯霉素和莱克多巴胺残留的时间分辨荧光免疫检测方法的研究

摘要

时间分辨荧光免疫分析(Time-resolvedFluoroimmunoassay，TrFIA)是利用镧系络合物作为标记物的的新型免疫分析技术，其络合物具有荧光寿命长、激发光谱带较宽、发射光谱带甚窄和Stokes位移(最大激发光波长与最大发射光波长之差)大等特点，可以消除背景荧光的干扰，有效提高检测方法的灵敏度。 本文首先合成了氯霉素单抗-DTTA-Eu3+、莱克多巴胺单抗-DTTA-Eu3+和莱克多巴胺单抗-DTTA-Sm3+，用于研究建立动物组织中兽药残留的时间分辨荧光免疫检测方法。建立了虾和鸡肉组织中氯霉素残留的时间分辨荧光免疫检测方法。以CAP-OVA作为包被抗原，稀释比为1∶3000，以氯霉素单抗-DTTA-Eu3+作为竞争反应物，稀释比为1∶200，竞争反应时间为1小时。方法的检测限为0.05ng/g，当添加浓度为0.1、1和5ng/g时，虾肉的回收率为101.2％～112.5％，批内变异系数为8.7％～14.6％，批间变异系数为9.6％～17.8％；鸡肉的回收率为104.9％～115.3％，批内变异系数为9.5％～12.1％，批间变异系数为10.8％～16.2％。与ELISA试剂盒和气相色谱方法分别进行对比检测，相关性良好。建立了猪肌肉和肝脏组织中莱克多巴胺残留的时间分辨荧光免疫检测方法。以RAC-OVA作为包被抗原，稀释比为1∶400，以莱克多巴胺单抗-DTTA-Eu3+(稀释比为1∶100)作为竞争反应物，方法的检测限为0.28ng/g，当添加浓度为1、5和10ng/g时，猪肉组织的回收率为88.2％～110.6％，批内变异系数为7.1％～13.6％，批间变异系数为14.3％～17.1％；猪肝组织的回收率为102.3％～118.5％，批内变异系数为8.9％～16.4％，批间变异系数为15.8％～20.5％，以ELISA试剂盒进行了对比试验，相关性良好。通过猪组织的残留消除试验，对建立的方法进行了应用确证研究。建立了同时测定猪肌肉组织中氯霉素和莱克多巴胺残留的双标记时间分辨荧光免疫检测方法。以RAC-OVA(稀释比为45/20000)和CAP-OVA(稀释比为6.7/20000)作为混合包被抗原，以氯霉素单抗-DTTA-Eu3+和莱克多巴胺单抗-DTTA-Sm3+作为混合竞争反应物，方法对氯霉素的添加回收率为102％-121.1％，批内变异系数为12.4％-16.8％，批间变异系数为17.2％-19.6％；对莱克多巴胺的添加回收率为69.8％-85.8％，批内变异系数为10.1％-16.3％，批间变异系数为18.6％-21.3％。与ELISA试剂盒进行对比检测，相关性良好。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章氯霉素残留的时间分辨荧光免疫检测方法研究

第三章莱克多巴胺残留的时间分辨荧光免疫检测方法研究

第四章兽药多残留的双标记时间分辨荧光免疫检测方法研究

第五章结论

参考文献

致谢