抗菌肽用于奶牛乳房炎的体细胞基因治疗

摘要

奶牛乳房炎是由多种细菌引起的一种常见多发疾病，也是影响奶牛养殖业最严重的疾病之一，而现在主要的抗生素疗法因其细菌耐药性和乳汁中抗生素残留等问题，日益危害到人类自身的健康，因而开发和研制无耐药性、无残留的非抗生素药物成为当务之急。本文利用抗菌肽基因ABPS1具有广谱抗菌活性的特点，构建抗菌肽乳腺特异性表达载体，对防治乳房炎进行了初步的研究。 在已构建的载体pVAX1-ABPS1的基础上，用BLG基因的启动子序列替换载体上的CMV启动子，然后用融合PCR的方法在抗菌肽基因上游分别加入β乳球蛋白基因的信号肽序列构建载体pBLG-sABPS1，加入人生长激素的信号肽序列构建载体pBLG-hABPS1。 取分娩前3-5天的母兔乳腺，用胶原酶消化法培养兔乳腺原代细胞。用脂质体转染的方法将pBLG-sABPS1和pBLG-hABPS1分别转染兔乳腺原代细胞，转染后24h、48h、72h分别取培养液浓缩后经Trine-SDS-PAGE分析后，转染后48h细胞培养液有4.8kDa大小蛋白的条带出现。转染后细胞通过光镜和扫描电镜的观察，未发现细胞在转染后有明显的变化。 采用乳导管注射法，将pBLG-sABPS1或pBLG-hABPS1以1mg的量注入患有乳房炎的奶牛的每个患病乳区。在注射后第14天，注射pBLG-hABPS1的乳区，CMT试验结果从++++、++++、++++、++++下降为-、±、++、+++，细菌总数分别从3.9×106、5.4×105、2.5×106、1.6×109降至＜1.0×102、＜1.0×102、3.0×102、4.1×103。注射pBLG-sABPS1的乳区,CMT和细菌总数均无明显变化。两组实验中均未能分离到特定致病菌。 以上结果表明，pBLG-hABPS1用于奶牛乳房炎的防治有明显的治疗效果，这为进一步的研究奠定了坚实的基础，也为奶牛乳房炎的防治提供了一种新的方法。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略词表

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章抗菌肽基因ABPS1乳腺特异表达载体的构建

第三章重组质粒在兔乳腺原代细胞中的表达及对细胞的作用

第四章抗菌肽重组质粒在乳房炎防治中的初步应用

第五章结论

参考文献

致谢

个人简历