血必净注射液对急性肺缺血-再灌注家兔TNF-α影响的实验研究

摘要

目的:通过置入2.7F冠状动脉球囊导管栓塞家兔左下肺动脉,成功建立急性肺栓塞缺血-再灌注兔动物模型。观察急性肺栓塞缺血-再灌注家兔模型血液中TNF-α水平和mRNA的表达变化,结合肺组织形态学改变,明确血必净注射液对急性肺缺血-再灌注损伤的保护作用,探讨血必净注射液保护急性肺缺血-再灌注损伤的作用机制,为中医药防治肺缺血-再灌注损伤提出理论依据。
　　方法:健康成年普通家兔30只,雌雄各半,按随机数字表法分为正常对照组(A组)、肺缺血再灌注组(B组)、血必净术前用药一天组(C1组)、血必净术前持续用药三天组(C2组)和血必净术前持续用药六天组(C3组)共5组,每组6只。A组在术中将2.7F冠状动脉球囊导管置于左下肺动脉开口,不栓塞左下肺动脉;B组于术前6天经耳缘静脉泵入生理盐水4 mL/kg,每日1次,术中用球囊导管栓塞左下肺动脉;C1、C2、C3组分别于术前1天、3天、6天经耳缘静脉泵入血必净注射液4 mL/kg+等量生理盐水,每日1次,手术方法同B组。实验过程中观察家兔呼吸频率、心率,30min/次,选择再灌注后30min观察结果进行组间比较;各组于手术前、栓塞后2小时、再灌注即刻、再灌注后2小时、再灌注后4小时分5次经耳缘静脉留取血清,ELISA测定TNF-α水平;再灌注后30min留取血液样本RT-PCR检测TNF-αmRNA表达;再灌注4小时后处死动物,肺组织HE染色光镜观察形态学变化。
　　结果:
　　1.30只健康成年普通级家兔,肺缺血-再灌注模型造模30只,成功24只,死亡6只,造模后肺动脉造影显示结果满意,造模成功率为75％。
　　2.呼吸频率、心率的变化:A组家兔实验过程中呼吸及心率无异常。B、C1、C2、C3组呼吸、心率较A组显著增快,均于再灌注30分钟后达到峰值,随后缓慢下降。选择再灌注后30min观察结果进行组间比较,B组呼吸、心率最快,A组最慢,C1、C2、C3组呼吸、心率变化介于A、B组之间,三组间C3组最慢。C1、C2组分别与B组比较无明显差异(P>0.05),两组组间比较无统计学意义(P>0.05);C3组与A组比较差异不明显(P>0.05),与B、C1、C2组比较均有显著性差异(P<0.05),提示实验过程中C3组呼吸频率、心率变化最小,最接近正常水平。
　　3.血清TNF-α水平:A组各时间点TNF-α水平变化不明显,无显著性差异(P>0.05)。B、C1、C2、C3组TNF-α水平在肺动脉栓塞后2小时均较栓赛前有所增高,差异有统计学意义(P<0.05),再灌注30分钟后达到峰值,随后下降。选择再灌注后30min TNF-α水平进行组间比较,B组最高,A组最低C1、C2、C3组介于A、B组之间,三组间C3组最低。C1、C2组分别与B组比有明显差异(P<0.05),两组组间比较无差异(P>0.05);C3组与A、B、C1、C2组比较均有显著性差异(P<0.05),提示TNF-α水平与肺缺血-再灌注损伤有关,血必净注射液可降低血清TNF-α水平,TNF-α水平下降程度与用药时间有一定相关性。
　　4.血液TNF-αmRNA的表达:选择再灌注后30min观察血液TNF-αmRNA的表达。RT-PCR显示各组均有TNF-αmRNA表达,半定量数据结果显示,A组最低,B组最低, C1、C2、C3组介于A、B组之间,三组间C3组最低。C1、C2组分别与B组比有明显差异(P<0.05),两组组间比较无差异(P>0.05);C3组与A组比较无明显差别(P>0.05),与B、C1、C2组间比较均有显著性差异(P<0.05),提示TNF-αmRNA表达与肺缺血-再灌注损伤有关,血必净注射液可降低血液TNF-αmRNA的表达且与用药时间有一定相关性。
　　5.肺组织病理形态学变化:A组未见明显病变,B组呈弥漫性病理改变,肺泡壁明显充血、水肿、增厚,炎细胞浸润,肺泡内有大量渗出物、红细胞等成分;C1组与B组对照肺损伤病理改变差别不明显, C2组肺组织水肿及渗出程度轻于B组,C3组肺水肿及炎性渗出明显轻于C2组,提示C3组病理变化程度最轻。
　　结论:本实验采用2.7F冠状动脉球囊导管建立急性肺栓塞缺血-再灌注兔动物模型,可控性强,动物死亡率较低,能客观真实反映肺缺血再灌注损伤的特征。血必净注射液能降低TNF-α浓度及TNF-αmRNA的表达,减轻肺组织的水肿和肺泡内的渗出,对肺组织的再灌注损伤具有保护作用。

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英文缩略语表

前言

实验研究

1.材料与方法

2 实验方法

3 观察方法与指标检测

4 统计学方法

5.实验流程图

结果

1.造模过程及成功率：

2. 再灌注30min后呼吸频率、心率的变化：

3. ELISA检测血清TNF-α水平

4. RT-PCR检测.血液TNF-αmRNA的表达：

5. 肺组织病理形态学变化

讨论

1. 家兔急性肺缺血-再灌注模型的特点

2. 肺缺血-再灌注损伤机制

3. 肺血管内皮损伤与肺缺血-再灌注损伤的关系

4. TNF-α与肺缺血-再灌注损伤中内皮细胞的关系

4. 血必净注射液对急性肺缺血再灌注家兔TNF-α的影响

结论

实验研究局限性

参考文献

文献综述

参考文献

综述二 肺缺血再灌注损伤相关细胞因子及损伤保护研究进展

参考文献

附件

致谢