亚毒性剂量THP联合TRAIL对前列腺癌细胞Du145体外生长影响的研究

摘要

目的：通过研究亚细胞毒性剂量的化疗药物吡柔比星（THP）和肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）对前列腺癌体外生长的影响，探讨两药单独用药和联合用药对人前列腺癌细胞Du145体外生长的影响，为TRAIL抗肿瘤作用的临床应用提供一个新的实验依据，可能为激素难治性前列腺癌的治疗寻求一种新的方案。
　　方法：常规方法培养前列腺癌细胞Du145，给予不同浓度的THP和TRAIL，分为单用THP组、单用TRAIL组、THP+TRAIL联合组、对照组和空白组。各组影响因素作用24小时后，采用MTT比色法测定不同药物浓度作用后，各组细胞生长抑制率，同时选定THP的亚毒性剂量。倒置相差显微镜下观察各组细胞形态学变化以及生长情况，再采用Annexin V/PI双染色法进行流式细胞术检测前列腺癌细胞Du145的凋亡率。各组药物刺激后，提取Du145细胞胞浆蛋白，采用Western-Blot法进行蛋白印迹显影，检测各组细胞胞浆蛋白内caspase-3的表达。
　　结果：
　　1、THP和TRAIL对人前列腺癌细胞株Du145均有抑制生长作用，THP的抑制作用较强，Du145细胞对其相对敏感。TRAIL虽有抑制作用，但Du145细胞对TRAIL并不敏感。
　　2、亚毒性剂量的THP联合不同药物浓度的TRAIL对Du145细胞有较强的抑制作用，并且呈现出较高的协同作用，其协同因子均大于1,最大协同因子CF=1.38807。
　　3、倒置相差显微镜下观察不同药物浓度刺激下，细胞出现不同程度的死亡。见附图。
　　4、流式细胞术检测发现药物刺激后出现不同程度的凋亡，THP+TRAIL联合组凋亡率最高。同时证明了协同杀伤作用是通过诱导细胞凋亡实现的。
　　5、采用Western-Blot法检测药物刺激后Du145细胞胞浆蛋白内caspase-3蛋白的表达，显影后可见THP+TRAIL联合组刺激后的细胞胞浆蛋白内caspase-3蛋白明显高于单用药物组和对照组。见附图。
　　结论：THP和TRAIL对人前列腺癌细胞株Du145的生长均有抑制作用，但Du145细胞对TRAIL并不敏感。亚细胞毒性的THP联合TRAIL可提高对Du145细胞的抑制作用。亚细胞毒性的THP联合TRAIL作用于Du145细胞，表现出明显的高诱导细胞凋亡作用，增加了Du145细胞凋亡率。亚细胞毒性的THP联合TRAIL作用于Du145细胞所表现的高诱导细胞凋亡作用可能与细胞胞浆蛋白中caspase3蛋白的高表达有关。

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引言

材料和方法

1. 实验材料、试剂和仪器

1.1 细胞株

1.2 主要实验仪器和设备

1.3 主要试剂

1.4 常用试剂配制

2. 实验方法

2.1 细胞培养

2.2 MTT法检测Du145细胞抑制率

2.3倒置相差显微镜下观察药物作用下细胞凋亡的形态学变化

2.4流式细胞仪检测Du145细胞药物作用后凋亡率

2.5Western-Blot法检测caspase-3

3. 统计学处理

结果

1.MTT法检测药物作用下Du145细胞增殖抑制率

1.1 TRAIL单药作用对Du145细胞的影响

1.2 THP单药作用对Du145细胞的影响

1.3 TRAIL和THP联合用药对Du145细胞的影响

2.倒置相差显微镜下观察药物作用下细胞凋亡的形态学变化

3.流式细胞仪检测Du145细胞药物作用后凋亡率

4.Western-Bolt法检测caspase-3的表达

讨论

结论

创新与不足

参考文献

附录A：

附录B 英中文术语和缩略语对照表

附录C 个人简历

附录D 综述:TRAIL联合治疗在前列腺癌中的研究进展