雪松松针总多酚的提取纯化及其抗氧化活性研究

摘要

雪松Cedrus deodara(Roxb) G.Don是松科Pianaceae植物雪松属Cedrus Trew树种的泛称，传统中医认为雪松具有祛风活络、止血活血、消肿生肌功效；现代药理研究表明，雪松具有抗氧化、抗病毒、抗褐变、抗肿瘤等药理活性。雪松在我国分布广泛，且其松针资源丰富。为开发利用雪松松针，本论文针对雪松松针中酚酸类物质的抗氧化活性进行了比较系统的研究，主要研究内容和结果如下：
　　1.HPLC法同时测定雪松松针中酚酸类物质没食子酸、原儿茶酸和儿茶素的含量：采用TC-C18（250nm×4.6mm,5μm）色谱柱，流动相为甲醇-0.2％磷酸水溶液梯度洗脱(0-8 min,10%A→10%A；8-45 min,10%A→30%A)，流速1.0mL/min，检测波长280nm，柱温25℃。结果表明，雪松松针中3个酚酸类化合物没食子酸、原儿茶酸和儿茶素依次在0.4～4.0μg/mL、4～40μg/mL和2～20μg/mL浓度范围内呈良好线性关系，相关系数在0.9998～0.9999之间；加样回收率（n=9）分别为104.70%、99.54%和105.84%。所建立的方法简单、快速、高效，适用于雪松松针中3个酚酸类成分的含量测定和质量控制。
　　2.雪松松针中总多酚的含量测定与超声提取工艺研究：以没食子酸为对照品，采用酒石酸亚铁分光光度法，在波长550 nm处测定雪松松针中总多酚含量，并以总多酚的含量为指标，在单因素试验基础上，通过响应面法对影响雪松松针总多酚提取工艺的主要因素（乙醇浓度、提取时间、液料比）进行分析优化。结果表明：没食子酸质量在0~1265μg范围内与吸光度呈良好的线性关系( r=0.9997)，平均回收率和RSD分别为103.10%和1.99%；最佳工艺条件为55%乙醇，料液比1:20（g/mL），超声提取65 min，提取次数为2次；在此最佳工艺条件下，总多酚的得率为5.46%。
　　3.大孔树脂纯化雪松松针中总多酚的工艺研究：以雪松松针总多酚的动态吸附率为指标筛选大孔树脂，采用紫外分光光度法测定雪松松针总多酚含量,对所筛选树脂分离雪松松针总多酚工艺进行评价。结果表明：HPD-600大孔树脂纯化雪松松针总多酚效果最好，最优工艺条件为：上柱液料浓度1.5 mg/mL，pH4.0-5.0，上柱体积8 BV，速率为2 BV/h，洗脱剂乙醇浓度70%，洗脱速率4 BV/h，洗脱体积3 BV。在此最佳工艺条件下，总多酚的纯度由9.88%提高到34.65%。
　　4.雪松松针总多酚的抗氧化活性评价：采用DPPH自由基和ABTS自由基清除试验，以VC、BHT为对照品，对雪松松针总多酚提取物的抗氧化活性进行初步评价；利用秀丽线虫模型，通过测定雪松松针总多酚提取物对秀丽隐杆线虫体内ROS水平的影响评价其体内抗氧化能力。结果表明，雪松松针总多酚对DPPH自由基、ABTS自由基均有较强的清除作用，纯化后总多酚提取物与VC清除DPPH自由基的能力接近；雪松松针总多酚显著降低了线虫体内的活性氧水平，表明其具有抗氧化活性。

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前言

实验研究

第一章 HPLC法同时测定雪松松针中没食子酸、原儿茶酸和儿茶素的含量

1 材料、试剂与仪器

2 方法与结果

3 小结

第二章 雪松松针中总多酚的含量测定与超声提取工艺研究

1 材料、试剂与仪器

2 方法与结果

3 小结

第三章 大孔树脂纯化雪松松针总多酚的工艺研究

1 材料、试剂与仪器

2 方法与结果

3 小结

第四章 雪松松针中总多酚的体内外抗氧化活性试验

1 材料、试剂与仪器

2 抗氧化性能的评价

3 小结

第五章 结语

1 主要结论

2 存在不足

参考文献

文献综述:植物多酚的提取分离、抗氧化测定方法及松科植物抗氧化作用的研究进展概述

1 植物多酚的提取方法

1.1 溶剂萃取法

1.2 超声辅助提取法

1.3 微波辅助提取法

1.4 超临界CO2萃取（SFE）

1.5 生物酶解提取

2 总多酚的分离纯化方法

2.1 有机溶剂萃取法

2.2 沉淀分离法

2.3 膜分离法

2.4 柱色谱法

3 抗氧化活性测定方法

3.1 体外抗氧化活性

3.2 体内抗氧化活性

4 松科植物抗氧化作用的研究进展

参考文献

致谢

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