脱管散对内固定物感染金黄色葡萄球菌生物膜动物模型干预的实验研究

摘要

目的：
　　1、内固定物感染金黄色葡萄球菌体外模型用脱管散干预，实验室环境下观察脱管散对金黄色葡萄球菌生物膜体外模型感染的抑制作用。
　　2、用脱管散干预成熟细菌生物膜动物模型，持续用药在电子扫描显微镜（SEM）下观察对不同时期金黄色葡萄球菌生物膜形态结构的抑制作用。
　　方法：
　　1、金黄色葡萄球菌株分离单菌落接种于L-Broth培养液中，并将其接种于24孔微量培养板中，用内固定物为细菌生物膜生长的载体，SEM观察细菌生长情况及变化。取培养板细菌生物膜样本用平板稀释法进行菌落计数
　　2、把脱管散制做成浓度为0.1g/ml的混悬液。
　　3、把60只健康青紫蓝兔随机分为3组，每组20只，第一组为对照组，第二组为实验组，第三组为空白组。各组均于第4天和第7天处死10只大白兔，取出内固定物，及切去组织标本。
　　4、分组将取出的内固定物，依次按照PBS冲洗,戊二醛溶液固定，不同梯度乙醇脱水，醋酸异戊酯置换，样本 CO2气体中临界干燥，离子溅射表面固镀膜，最终制作成SEM检测样本，观察金黄色葡萄球菌生物膜形态结构变化。
　　5、将分组取出的内固定物周围组织，做成石蜡切片，然后石蜡切片HE染色，制片完成，显微镜下观测炎症细胞（中性粒细胞、吞噬细胞、巨噬细胞）、成纤维细胞在两个时间段的变化。
　　结果：
　　1、金葡菌培养过程中明显可见培养板中LB肉汤浑浊，7d后内固定物表面形成成熟金黄色葡萄球菌生物膜。细菌菌落计数统计结果显示：随着培养时间的不断增加， LB肉汤中金黄色葡萄球菌的浓度呈上升趋势，脱管散给药组 LB肉汤中金黄色葡萄球菌的浓度呈下降趋势。
　　2、青紫蓝兔随着实验分组处死取材制作样本送检，对照组的内固定物表面金黄色葡萄球菌生物膜逐渐增加，实验组脱管散干预，其对内固定物表面金黄色葡萄球菌生物膜的抑制作用逐渐增强,空白组结果显示无细菌和生物膜生成，有成纤维细胞生成，结果表明脱管散干预实验组对金黄色葡萄球菌生物膜有较强的抑制作用。
　　3、通过不同分组的组织病理学检查，对照组炎性细胞逐渐增加，成纤维细胞生成较少；脱管散干预实验组的组织病理学检查炎性细胞逐渐减少，成纤维细胞逐渐增加；空白组炎性细胞生成较少，成纤维细胞逐渐增加；脱管散干预实验组对金黄色葡萄球菌生物膜感染创面有促进愈合的作用。
　　结论：
　　1、脱管散对内固定物感染金黄色葡萄球菌生物膜体外模型感染有抑制作用。
　　2、脱管散对内固定物感染金黄色葡萄球菌生物膜形态结构有抑制作用。
　　3、脱管散对内固定物感染金黄色葡萄球菌生物膜的创面有促进愈合的作用。
　　3、通过不同分组的组织病理学检查，对照组炎性细胞逐渐增加，成纤维细胞生成较少；脱管散干预实验组的组织病理学检查炎性细胞逐渐减少，成纤维细胞逐渐增加；空白组炎性细胞生成较少，成纤维细胞逐渐增加；脱管散干预实验组对金黄色葡萄球菌生物膜感染创面有促进愈合的作用。
　　结论：
　　1、脱管散对内固定物感染金黄色葡萄球菌生物膜体外模型感染有抑制作用。
　　2、脱管散对内固定物感染金黄色葡萄球菌生物膜形态结构有抑制作用。
　　3、脱管散对内固定物感染金黄色葡萄球菌生物膜的创面有促进愈合的作用。

目录

封面

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中文摘要

英文摘要

符号说明

前言

立题依据

实验一 脱管散对内固定物表面金黄色葡萄球菌生物膜体外研究菌落计数观察

1.实验材料和仪器

2．实验内容与方法

3．统计学分析

4．实验结果

实验二 脱管散对金黄色葡萄球菌生物膜形态结构影响及创面组织病理学观察

1. 实验材料和仪器

2．实验内容与方法

3．实验结果

讨论

1、金黄色葡萄球菌生物膜的耐药性

2、脱管散对金黄色葡萄球菌生物膜的体外模型的抑制和杀灭作用

3、脱管散对金黄色葡萄球菌生物膜形态的影响

结语

一 结论

二 问题与展望

参考文献

附录1： 实验设备及工作现场（1）

附录2：内固定物表面BF扫描电镜检查

附录3：病理组织学检查

附录4：实验动物质量合格证

文献综述:细菌生物膜研究进展

致谢

在学期间主要研究成果