利用RAPD标记对不同品种（系）甜瓜遗传多样性研究

摘要

本研究利用了形态学标记、同工酶标记和RAPD标记方法对22份甜瓜种质资源进行了遗传多样性的研究,结果如下:通过系统观察22份种质的植物学和生物学性状,用表现型性状标准差标准化的方法,应用SPSS软件,以Num5为阈值,将上述种质分为4类,绘制了亲缘关系聚类图,图中没有体现传统分类系统中的厚皮甜瓜变种群.利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术对22个甜瓜品种(或杂种)进行了过氧化物酶同工酶分析,电泳共分离出12条酶带,多态性带数8条,多态性带数的百分率为66.67﹪.本实验采用SDS法和CTAB法,用完全展平的子叶为材料提取总DNA.通过试验确定了适合甜瓜的最佳PCR反应成分(包括dNTP、引物、Mg<'2+>、TaqDNA聚合酶等的浓度组合),并通过对变性、退火、延伸时间,退火温度和循环次数的优化试验确定了省时的扩增程序,最终得到一个重复性好、清晰度高、较理想的RAPD-PCR扩增体系.

目录

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引言

第一章文献综述

1.1遗传标记的种类

1.1.1形态学标记

1.1.2细胞学标记

1.1.3生化标记

1.1.4 DNA分子标记

1.2遗传标记在甜瓜遗传多义性研究中的应用

1.2.1形态标记在甜瓜起源和分类中的应用

1.2.2同工酶标记在甜瓜遗传多样性的应用

1.2.3分子标记在甜瓜遗传多样性上研究

1.3本实验研究的目的

第二章材料与方法

2.1材料

2.2形态标记

2.2.1方法

2.2.2主要仪器

2.3过氧化物酶同工酶

2.3.1试验材料、仪器、试剂

2.3.2试验方法

2.4分子标记

2.4.1试验材料、仪器、试剂

2.4.2试验方法

2.4.3 RAPD反应体系的优化

2.4.4琼脂糖凝胶电泳

2.4.5电泳谱带的记录

2.4.6数据分析

第三章结果分析

3.1形态标记分析

3.2过氧化物酶同工酶分析

3.2.1粗酶液的提取

3.2.2酶谱分析

3.3 RAPD分析

3.3.1基因组DNA的制备

3.3.2 RAPD反应体系条件的优化和建立

3.3.3引物的筛选结果

3.4 RAPD谱带及其多态性分析

3.5遗传距离与RAPD聚类分析

第四章结果与讨论

4.1形态学标记在种质资源上的利用

4.2过氧化物酶同工酶粗酶液的制备

4.3甜瓜品种过氧化物酶同工酶酶谱特征分析

4.4同工酶技术在亲缘关系分类上必须注意的问题

4.5关于甜瓜基因组DNA的制备

4.6 RAPD反应对模板DNA要求

4.7 RAPD反应体系的优化

4.7.1关于模板DNA质量与含量

4.7.2关于Mg2+浓度、dNTP浓度和引物浓度

4.7.3关于TaqDNA聚合酶

4.7.4关于变性、退火、延伸的温度和时间，以及循环周期的影响

4.7.5污染问题

4.7.6影响扩增结果的外部因素

4.8关于应用RAPD技术时所采用引物数量和统计方法

4.9 RAPD技术在甜瓜亲缘关系研究中的可行性

4.10甜瓜遗传多样性分析

第五章结论

5.1形态学标记

5.2 RAPD反应条件优化和建立

5.3甜瓜遗传多样性的分析

附录1:引物名称及序列

附录2：缩略词

致谢

参考文献

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